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树突状细胞多价核酸疫苗抗血吸虫感染作用及机制研究
目的 探讨基因转染对树突状细胞(DC)功能的影响及DC多价核酸疫苗抗血吸虫感染作用及机制.方法 利用脂质体介导的基因转染技术将Sj26、Sj23和Sj14基因分别转染DC,流式细胞术(FCM)检测DC摄取抗原能力,混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC对同种异体T淋巴细胞的刺激作用.Sj26、Sj23和Sj14基因转染DC分别和联合免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫2周后,每只小鼠感染日本血吸虫尾蚴40条,小鼠感染血吸虫6周后,计数成虫和虫卵.ELISA法检测血清特异性IgG、血清干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)及脾淋巴细胞培养上清IFN-γ、IL-4水平,噻唑蓝(MTT)法检测脾淋巴细胞的增殖.结果 与真核表达载体pcDNA3转染DC和未处理DC相比较,基因转染DC摄取抗原的荧光强度明显降低(P＜0.01),对同种异体T淋巴细胞的刺激指数明显升高(P＜0.01).各免疫组小鼠诱导的减虫率和减卵率均高于对照组(P＜0.01),而基因转染DC联合免疫组小鼠抗血吸虫感染作用高于单一基因转染DC免疫组(P＜0.001).基因转染DC免疫组小鼠末次免疫2周后血清特异性IgG水平较免疫前显著升高(P＜0.05),血清IFN-γ水平明显升高(P＜0.01),而血清IL-4的水平无明显变化.与对照组比较,基因转染DC免疫组小鼠脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后培养上清IFN-γ水平显著增高,IL-4水平显著降低,刺激指数(S1)显著增高(P＜0.001).结论 基因转染能促进DC的成熟,增强DC的活性,DC多价核酸疫苗可增强抗血吸虫感染作用,其作用机制以Th1型免疫应答为主.
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结核杆菌多价核酸疫苗的构建及其免疫原性的初步研究
目的 构建包含结核杆菌3种抗原蛋白Ag85A、ESAT-6和CFP-10真核表达质粒的多价DNA疫苗,并对其在小鼠体内的免疫原性进行初步分析.方法 PCR扩增获得结核杆菌ag85a、esat-6和cfp-10基因片段,分别克隆入真核表达质粒VR1020的BamHⅠ位点构建DNA疫苗,以此多价DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测小鼠体内的特异性抗体应答和细胞免疫反应,并与BCG免疫组、质粒VR1020免疫组和生理盐水对照组相比较.结果 多价DNA疫苗免疫小鼠后能产生特异性的细胞和体液免疫应答,DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞IFN-γ的表达量显著高于BCG免疫组,而DNA疫苗免疫组小鼠所产生的特异性抗体水平低于BCG免疫组.结论 成功构建了结核杆菌多价DNA疫苗,免疫小鼠后检测到特异性细胞和体液免疫应答.
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结核杆菌多价核酸疫苗在小鼠体内的免疫保护效应研究
目的:探讨结核杆菌Ag85 A/ESAT-6/CFP-10多价核酸疫苗的动物免疫保护效应.方法:将24只BALB/c小鼠随机分成4组,多价核酸疫苗免疫组每只小鼠股四头肌肌肉注射重组质粒VR1020-85A、VR1020-E6和VR1020-P10各25μg(溶于100 μL灭菌生理盐水中)进行免疫接种,3周后加强免疫1次.其余3组均为对照组,分别是生理盐水注射组、空白质粒VR1020免疫组和卡介苗(mycobacterium bovis bacillus calmette-guérin,BCG)免疫组.每只小鼠于初次免疫6周后经腹腔注射结核杆菌H37Rv(菌落数为1×105)进行攻击,攻击实验28 d后取小鼠肺组织作结核杆菌培养和病理形态学检测.结果:多价核酸疫苗免疫组小鼠肺组织结核杆菌培养带菌量明显低于生理盐水注射组和空白质粒免疫组(P＜0.05),但明显高于BCG免疫组(P＜0.05).多价核酸疫苗免疫组小鼠肺组织病变明显轻于生理盐水注射组和空白质粒免疫组,但明显重于BCG免疫组.结论:结核杆菌Ag85A/ESAT-6/CFP-10多价核酸疫苗免疫小鼠后能产生一定程度的抗结核免疫保护效应,但其免疫保护效应不及BCG.
