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重组人EC-SOD包涵体的复性
目的将E.coli中表达的人胞外超氧化物歧化酶(hEC-SOD)包涵体进行复性.方法分离包涵体,用8mol/L尿素溶解后进行透析复性.结果包涵体蛋白可以部分复性,比活达到900U/mg protein.结论透析复性法可以复性EC-SOD包涵体.
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EC-SOD在大肠杆菌中的可溶性表达
目的在大肠杆菌中表达可溶性EC-SOD.方法将表达质粒EC-pet28a(+)转入宿主菌BL21(DE3)plysS中进行表达,在低温下培养含表达质粒EC-pet28a(+)的宿主菌BL21(DE3),通过SDS-PAGE电泳,观察其在超声上清中的表达.结果 EC-SOD在BL21(DE3)plysS中表达,其量比在BL21(DE3)降低约20%,上清中有明显表达;在20℃和15℃培养时,EC-SOD在BL21(DE3)的超声上清中有表达.结论 EC-SOD在BL21(DE3)plysS中或在BL21(DE3)中低温培养,均可实现部分上清中的表达.
关键词： EC-SOD BL21(DE3)plysS 基因表达 -
大孔吸附树脂在EC—SOD纯化中的作用
目的 本文主要论述了大孔吸附树脂在EC-SOD的分离与纯化中所起的作用.该研究在大孔吸附树脂的应用方面有很大的开创性意义.方法 研究了非极性大孔吸附树脂在蛋白纯化中去除杂蛋白及DNA碎片、色素等成份的效果.结果 研究结果表明在33℃,上样量在30%总吸附量,上样速度在20mL·min-1、Ph值为7时有很好的吸附解吸附效果,蛋白回收率90%以上.结论 非极性大孔吸附树脂对于粗蛋白的纯化去除杂质效果显著,快速方便,成本低,更适于产业化.
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pCDNA 3.1/EC-SOD真核载体的构建及在巨噬细胞中的表达
目的为明确EC-SOD在动脉粥样硬化发生发展中的作用,课题组体外构建pCDNA 3.1/EC-SOD真核表达载体,并观察其在THP-1单核源性巨噬细胞中的表达情况。方法重组质粒经PCR、酶切以及序列分析正确无误后,借助Lipofectamine 2000将转染到THP-1单核源性巨噬细胞中,24h后倒置荧光显微镜下观察转染情况。结果重组质粒经酶切鉴定、PCR和测序分析后,证实pCDNA 3.1/EC-SOD质粒构建成功。将pCDNA 3.1/EC-SOD通过脂质体转入THP-1单核源性巨噬细胞后,倒置荧光显微镜下观察转染效率。结论 pCDNA 3.1/EC-SOD载体构建成功,并成功在THP-1单核源性巨噬细胞中表达,为研究EC-SOD在动脉粥样硬化发生发展中的作用奠定了基础。
关键词： EC-SOD THP-1单核源性巨噬细胞
