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包装病毒文献资料
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重组HDV核酶逆转录病毒的生产及对HBV抑制效率的测定
目的:构建含HDV核酶基因的重组逆转录病毒载体,包装出逆转录病毒实现其在HepG2215细胞中稳定表达,并研究其是否抑制HBV的复制.方法:应用PCR方法扩增HDV核酶基因,克隆入逆转录病毒载体pMSCV/U6中,用脂质体法转染逆转录病毒载体包装细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,用PCR和药物抗性水平传播分析检测野生型辅助病毒.收获的病毒感染HepG2215细胞,用酶联免疫实验测定对HBV的抑制率.结果:重组逆转录病毒载体的酶切鉴定片段约为73 bp,与预期值一致.脂质体转染包装细胞,嘌呤霉素加压筛选出高病毒滴度(4.0×106 CFU/ml)的细胞克隆,且未检测到辅助病毒,对HBV的抑制率高可达61.56%.结论:成功构建重组逆转录病毒载体,在包装细胞系中能生产出高滴度的逆转录病毒,能有效的抑制HepG2215细胞内HBV的复制,为HBV的基因治疗提供了实验数据.
关键词： 核酶 包装病毒 HepG2215细胞
