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紫杉醇协同肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制胶质瘤细胞活性的探讨
目的：探讨紫杉醇（PX）联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对胶质瘤 U251细胞凋亡作用的影响及其可能机制。方法分别采用改良 MTT 法和流式细胞术检测 PX 和 TRAIL 单独用药以及 TRAIL／PX 联合用药 U251细胞后细胞增殖和凋亡的情况，采用 Western bloting 法检测 PX 对 U251细胞 TRAIL 受体 DR4和 DR5表达的影响。结果TRAIL 和 PX 单独用药对 U251细胞增殖均具有抑制作用且呈浓度依赖性，TRAIL／PX 联合作用对 U251细胞生长抑制率和凋亡率均大于单独用药（P ＜0．05），TRAIL／PX 联合用药与单独用药相比可显著上调 DR4表达（P ＜0．05），DR5表达无明显变化。结论PX 可协同 TRAIL 上调 DR4的表达，进而提高胶质瘤细胞对 TRAIL 的敏感性，抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。
关键词： 胶质瘤 紫杉醇 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 U251 细胞 凋亡 -
人 Smad 4基因在胶质瘤细胞中的作用研究
目的：构建人 Smad 4基因质粒体并检测其在胶质瘤细胞系 U251内的表达水平及作用。方法构建 PEGFP-Smad4质粒体,应用 FUGENE HD 转染质粒体进入 U251,G418筛选,挑出单克隆扩增,建立稳定细胞株 N1-U251和 Smad4-U251。将实验分为空白组(U251细胞)、N1组(空质粒-U251)、Smad4组(Smad4-U251),检测 Smad4基因和蛋白表达水平；使用 CCK8法检测空白组、N1组、Smad4组细胞活性。使用流式细胞术检测细胞凋亡率,使用免疫印迹技术检测 Caspase 3与 p-Histone H3蛋白表达水平。结果PEGFP-Smad4质粒体构建成功,N1-U251,Smad4-U251稳定细胞株构建成功,CCK8显示空白组、N1组、Smad4组细胞活性分别是1±0.03、0.95±0.04、3.22±0.13,Smad4组与 N1组比较,差异明显(P <0.05),免疫印迹显示高表达 Smad 4组 pHistoneH 3表达水平明显增高；空白组、N1组、Smad 4组在经替莫唑胺化疗处理后细胞凋亡率分别为0.36±0.09、0.38±0.11、0.21±0.03,Smad 4组与 N1组比较,差异明显(P <0.05)；免疫印迹显示高表达 Smad 4组 Caspase 3表达水平明显降低。结论成功构建人 Smad4质粒体并建立高表达 Smad4的细胞系,高表达 Smad4可以提高 U251细胞活性,降低化疗敏感性。
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上调 Notch－1基因对 U215细胞 AKT －mTOR 通路的影响
目的：观察上调 Notch －1基因对人胶质瘤 U251细胞生学物行为及 AKT －mTOR 信号通路的影响。方法：采用 pNL －NICD 慢病毒感染 U251细胞，以 RT －PCR 和 Western －Blot 检测 Notch －1基因 mRNA 和蛋白的表达，以 MTT 检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期变化，Transwell 实验检测细胞侵袭能力，同时检测 Notch －1上调对 AKT、mTOR、P70S6K、4Ebp －1蛋白的影响。结果：与对照组比较，NICD 慢病毒转染72h后，Notch －1基因 mRNA 和蛋白表达明显增高（P ＜0．01）；Notch －1上调明显促进 U251细胞增殖、侵袭、促进细胞进入 S 期，增加周期蛋白 Cyclin D1、CDK －4的表达，促进 AKT、mTOR 蛋白磷酸化。结论：上调 Notch －1基因促进 U251细胞增殖、侵袭，其机制和活化 AKT －mTOR 通路有关。
关键词： Notch-1 基因 AKT -mTOR 信号 胶质瘤 U251 细胞
