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SNAP对大鼠生长激素腺瘤GH3细胞增殖、生长激素分泌的影响及机制探讨
目的 观察一氧化氮(NO)释放剂S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)对大鼠生长激素(GH)腺瘤GH3细胞增殖、GH分泌的影响,并探讨其机制.方法 将细胞分为A、B、C、D组,A组常规培养,B、C、D组分别加ghrelin、SNAP、SNAP+ ghrelin培养.分别于培养第0、1、2、3、4、5、6天,用MTT法检测细胞吸光度值观察细胞增殖情况；培养2h后,用ELISA法检测GH3细胞培养液中的GH,Western blot法检测GH3细胞中的磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK).结果 A组培养第2、3、4、5、6天时细胞吸光度值分别为0.381 ±0.006、1.664±0.005、3.411±0.005、5.221 ±0.005、10.055±0.005,B组分别为1.062±0.005、3.115 ±0.005、4.512±0.005、6.656±0.005、11.060±0.005,C组分别为0.161 ±0.006、0.413 ±0.005、0.931 ±0.005、1.861 ±0.005、5.612±0.005,D组分别为0.219±0.004、0.865±0.005、1.712 ±0.005、3.059±0.005、6.561±0.005；B组与A组、C组与A组、D组与B组比较,P均＜0.01.培养2h时,A、B、C、D组GH3细胞培养液的吸光度值分别为0.080±0.002、0.165±0.011、0.041±0.003、0.106±0.005,pERK表达量分别为0.301 8±0.0045、0.682 5±0.003 8、0.192 3±0.008 6、0.298 5±0.006 7,B组与A组、C组与A组、D组与B组比较,P均＜0.01.结论 SNAP可抑制ghrelin诱导的GH3细胞增殖及GH分泌,可能与其阻断ghrelin激活的ERK信号通路有关.
关键词： S-亚硝基-N-乙酰青霉胺 生长激素 细胞外信号调节激酶 -
NO介导的小鼠胸腺细胞中线粒体的变化在细胞凋亡过程中的作用
目的:研究一氧化氮(NO)介导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电位(△ψm)和心磷脂(CL)含量变化的特点.方法:以S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)作为NO的供体诱导胸腺细胞凋亡,以地塞米松(DEX)作为阳性对照药物;设空白对照组、SNAP组和DEX组3个实验组;经膜联蛋白Ⅴ(annexinⅤ mAb)和碘化丙啶(PI)染色后,用流式细胞术(FCM)检测细胞磷脂酰丝氨酸(PS)外翻;用3,3'-二已基噁羰花青碘化物[DiOC6(3)]和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中△ψm变化;用壬基吖啶橙(NAO)和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中线粒体CL变化.结果:SNAP作用后6 h,胸腺细胞出现典型的细胞凋亡特征,多数annexin Ⅴ阳性的细胞出现皱缩.DEX组△ψm降低且未凋亡的细胞比例显著高于空白对照组(P＜0.01);而SNAP组该群细胞所占比例与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).各组中约40%～50%的DiOC6(3)阴性细胞同正常细胞的大小.SNAP组CL含量降低的凋亡细胞所占比例显著高于对照组(P＜0.01),未见CL含量降低且未凋亡的细胞群.空白对照组和SNAP组中分别有(48.32±3.96)%、(43.64±4.90)%的细胞CL含量降低但大小同正常细胞.结论:NO介导的小鼠胸腺细胞的凋亡过程,依次为磷脂酰丝氨酸外翻、线粒体去极化、CL氧化及细胞皱缩.同DEX模型组相比较,NO介导的小鼠胸腺细胞线粒体的变化为凋亡过程中较晚期的变化.
关键词： 一氧化氮 S-亚硝基-N-乙酰青霉胺 线粒体 凋亡
