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抑制Cks1表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭转移能力的影响及机制探讨
目的 观察抑制Cks1表达对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭转移能力的影响,并探讨其机制.方法 将MCF-7细胞分为两组,观察组细胞经脂质体转染Cks1 siRNA,对照组细胞转染Scrambled siRNA;分别采用MTS法、Transwell小室实验观察MCF-7细胞的增殖及侵袭转移能力,采用Western blot法检测MCF-7细胞中的MMP-2、MMP-9蛋白.结果 观察组转染60、84、108、132 h后,MCF-7细胞的OD值分别为0.15±0.01、0.3+0.02、0.7±0.01、1.3±0.02,对照组分别为0.2+0.01、0.5±0.01、1.3±0.03、1.8±0.02,两组转染84、108、132 h细胞OD值比较,P均＜0.05.观察组转染48 h,侵袭细胞数为(150±17)个、转移细胞数为(210±22)个,对照组分别为(550±90)、(660±96)个,两组比较,P均＜0.05.转染后12 h,观察组MMP-2、MMP-9蛋白表达量为0.05±0.002、0.10±0.002,对照组分别为0.95±0.020、0.98±0.030,两组比较,P均＜0.05.结论 抑制Cks1表达可显著抑制MCF-7细胞的增殖、侵袭转移能力,该作用可能与MMP-2、MMP-9蛋白表达降低有关.
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MicroRNA-224靶向CNNM1抑制前列腺癌血管生成的实验研究
目的 研究microRNA-224(miR-224)对前列腺癌生化复发及血管生成的影响.方法 生物信息学分析及荧光素酶报告实验预测细胞周期调节蛋白1(CNNM1)受miR-224负性调控.Taylor前列腺癌数据库分析、验证CNNM1、miR-224的表达关系及其与前列腺癌生化复发的相关性.前列腺癌PC3细胞体外培养及动物体内成瘤实验研究CNNM1、miR-224表达对前列腺癌微血管生成标志物CD31的影响.结果 CNNM1表达受miR-224靶向调节,前列腺癌组织中CNNM1与miR-224的表达呈负相关(P<0.05).miR-224与前列腺癌的生化复发呈负相关(P<0.05),CNNM1与前列腺的生化复发呈正相关(P<0.05);在过表达miR-224的PC3细胞株内,CNNM1和CD31的表达量下降;CNNM1过表达能促进CD31的生成.前列腺癌细胞裸鼠体内成瘤组织免疫组织化学法染色提示,miR-224过表达能抑制前列腺癌组织内微血管形成.结论 miR-224通过靶向调控CNNM1表达,抑制前列腺癌微血管形成,控制前列腺癌生化复发.
关键词： 前列腺癌 microRNA-224 细胞周期调节蛋白1 生化复发 血管生成 -
microRNA-199b-5p在尤文肉瘤细胞系中的功能研究
目的 探讨microRNA-199b-5p(miR-199b-5p)在尤文肉瘤细胞系中的功能,分析其作用机制,以期为临床生物学治疗提供理论依据.方法 取人尤文肉瘤细胞系A673、TC252,分别以miR-199b-5p寡核苷酸片段(mimic)及其阴性对照(mimic control)转染,作为实验组及对照组.实时荧光定量PCR检测miR-199b-5p mRNA相对表达量,并与MSCs比较;细胞计数试剂盒8法检测miR-199b-5p对细胞增殖的影响;流式细胞术法检测对细胞周期及凋亡的影响.双荧光报告基因实验初步检测miR-199b-5p可能作用的靶基因,Western blot验证靶基因.结果 实时荧光定量PCR检测示,对照组A673细胞及TC252细胞中的miR-199b-5pmRNA相对表达量与MSCs相比均显著下降(P＜0.05),与实验组对应细胞相比亦显著下降(P＜0.05).与对照组对应细胞相比,实验组处于G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,比较差异均有统计学意义(P＜0.05);而两组G2/M期细胞无明显差异(P＞0.05).实验组细胞凋亡率与对照组对应细胞相比显著增高(P＜0.05).双荧光报告基因实验检测miR-199b-5p可能作用的靶基因是细胞周期调节蛋白1(cyclin-L1,CCNL1)和c-Kit.Western blot检测显示,与对照组对应细胞相比,实验组CCNL1和c-Kit蛋白相对表达量明显下调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-199b-5p能抑制尤文肉瘤细胞增殖,阻滞细胞周期转换,促进细胞凋亡,其抑制作用是通过靶向CCNL1和c-Kit实现的.
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KOZAK序列对乳腺癌MDA-MB-231细胞CCNL1基因表达的影响
目的:探讨 KOZAK 序列对细胞周期调节蛋白 1 (CCNL1)基因在人乳腺癌细胞MDA-MB-231 中表达的影响.方法:构建 pcDNA3.1-CCNL1 和 pcDNA3.1-CCNL1-K (含有 KOZAK 序列)的真核重组表达质粒,采用 Fugene HD 转染试剂将重组表达质粒转染入 MDA-MB-231 细胞,并用荧光定量 PCR 和 Western blot 方法检测 pcDNA3.1-CCNL1 和 pcDNA3.1-CCNL1-K 重组质粒在 MDA-MB-231 细胞中表达的差异.结果:在 MDA-MB-231 细胞中质粒 pcDNA3.1- CCNL1-K 比空白对照细胞 mRNA 和蛋白质表达量要高;而质粒 pcDNA3.1- CCNL1 比空白对照细胞 mRNA 和蛋白质表达量也高.结论:在 MDA-MB-231 细胞中,质粒 pcDNA3.1- CCNL1-K 较 pcDNA3.1- CCNL1 的 mRNA 和蛋白表达水平均存在差异,KOZAK 序列能够提高 CCNL1 基因在 MDA-MB-231 细胞中的表达.
关键词： Kozak序列 细胞周期调节蛋白1 乳腺癌 MDA-MB-231细胞
