首页 > 文献资料
-
重组可溶性补体1型受体在酵母SMD1168中表达纯化及鉴定
目的 在酵母细胞SMD1168中表达人可溶性补体1型受体(sCR1),并对其重组蛋白进行纯化以探讨较为接近人体天然蛋白的表达方式,从而为临床诊断及治疗提供方便.方法 从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆人真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pP1C9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2+--NTA agarose亲和层析纯化.结果 经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48-72hsCR1融合蛋白表达量高.此蛋白在凝胶上表现为大于31kD的蛋白区带,在Western blot实验中可被sCR1的CD35单克隆抗体识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白.结论 人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性.
-
重组sCR1在毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定
目的:酵母细胞SMD 1168表达人sCRI,并对重组蛋白进行纯化.方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCRI全长eDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCRI的重组质粒(pPIC9K-sCRI);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD 1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化.结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCRl的酵母细胞表达出重组人sCRI的融合蛋白,48～72 h sCR1融合蛋白表达量高.此蛋白在凝胶上表现为Mr大于31 KDa的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCRl的CD35单克隆抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCRI融合蛋白.结论:人sCRI融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性.
-
重组人sCR1在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定
目的:酵母细胞SMD1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化.方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化.结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48～72 h sCR1融合蛋白表达量高.此蛋白在凝胶上表现为Mr约31 000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白.结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性.
