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1例B亚型的血型鉴定及其输血策略探究
目的:研究1例正反定型不对照的B亚型患者的血清学和分子生物学特征.方法:取患者的静脉血进行正反定型、吸收放散实验、不规则抗体筛查及唾液物质检测等一系列血清学检验,并通过PCR-SSP方法基因分型,终经DNA测序第6和第7外显子明确亚型种类.结果:血清学检测提示为弱B亚型,PCR-SSP分型为BO1,DNA测序显示与B101,序列相比发生nt6955位T/C点突变,232位亮氨酸突变为脯氨酸(L232P),国际命名为Bw11亚型.据此结果指导临床用血.结论:检测到1例Bw11亚型,加强围术期血液管理,减少血液丢失及异体血输入,为临床安全用血提供相应的经验参考.
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ABO亚型分析及基因测序研究方法的建立
目的:建立一种ABO血型基因的测序检测方法,对ABO血型的基因突变位点进行分析,并对ABO亚型进行准确分型.方法:采用PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,选取特异性引物对ABO基因的第6、7外显子及第6内含子进行扩增,并用PCR直接测序方法对该序列进行分析,在此基础之上,用该方法对经血清学鉴定为亚型的样本进行检测.结果:建立的PCR产物直接测序方法,能够准确的对ABO基因的第6、7外显子序列进行分析,并通过此方法鉴定了1例B亚型,其基因型为B/O杂合,其中α-1,3半乳糖基转移酶基因在第7外显子上发生第721位C＞T突变,导致了多肽链Arg241Trp的替换.结论:建立了一种ABO血型基因产物的PCR直接测序方法,并对ABO亚型进行了分析,为以后血型鉴定及其亚型分子机制的研究奠定了基础.
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ABO血型变异与B糖基转移酶关系研究
目的：研究ABO血型B亚型系统Bw亚型与B糖基转移酶的关系。方法运用血型血清学鉴定方法鉴定1个家庭2例ABO血型的Bw亚型，运用聚合酶链式反应的方法扩增糖基转移酶1～7号外显子，送到试剂公司测序。结果直接测序发现2例ABO血型的Bw亚型，其中B糖基转移酶基因第721位C＞ T的转变，导致糖基转移酶多肽链Arg241Trp的转变。结论糖基转移酶基因第721位的C＞ T的突变引起糖基转移酶活性的消失或者减弱，导致Bw亚型。
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α1,3半乳糖基转移酶基因721C>T突变导致Bw亚型
目的研究红细胞ABO血型系统Bw亚型的分子基础. 方法通过标准血型血清学方法明确鉴定2个家庭3例Bw亚型,PCR扩增Bw亚型ABO糖基转移酶基因的增强子、启动子和第1～7外显子及侧翼内含子序列,PCR产物经割胶纯化后直接测序.同时将第6和7外显子克隆到pcDNA3.1(-)质粒,转化DH5α后进行序列分析.采用序列特异性引物-聚合酶链反应方法证实测序所发现的突变.结果直接测序发现3例Bw亚型的基因型为B/O杂合,其中糖基转移酶基因的第261位G杂合缺失,第721位C/T杂合.克隆证实一条染色体上为正常的O等位基因,另一条染色体上B等位基因(α1,3半乳糖基转移酶基因)存在第721位C>T突变,导致多肽链Arg241Trp替换.序列特异性引物-聚合酶链反应检测140份随机样本未发现此突变. 结论α1,3半乳糖基转移酶基因第7外显子721C>T突变可能是Bw亚型分子遗传基础之一.
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两例ABO变异型Bw亚型的分子遗传学分析
目的 研究ABO变异型Bw亚型的分子生物学特性.方法 通过标准血型血清学方法鉴定2例Bw亚型,采用聚合酶链反应-序列特异性(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)技术进行ABO基因分型,特异性扩增B基因第6～7外显子,PCR产物纯化后直接测序分析.结果 血清学鉴定2例Bw亚型,PCR-SSP结果显示样本基因型为B/O2.B基因直接测序结果发现1例与B101序列比对第7外显子存在721C＞T突变,导致多肽链R241S替换;另1例与B101比对第6外显子存在278C＞T突变,导致多肽链P93L替换.结论 发现Bw03、Bwl2亚型各1例,其表达B抗原的强弱存在差异.
