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稳定高表达人野生型DNA polβ食管癌细胞Ec9706的生物学特征
目的:建立稳定高表达人野生型DNA聚合酶beta(polβ)的食管癌细胞系Ec9706,并对该细胞系的生物学特征进行分析.方法:脂质体转染法将人野生型polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入Ec9706细胞,荧光显微镜观察转染效果,经G4l8筛选得到稳定转染细胞系.RT-PCR方法检测转染细胞polβmRNA的表达水平,绘制生长曲线,软琼脂实验测细胞克隆形成率,MTr法测转染前后细胞对顺铂的敏感性.结果:荧光显微镜下转染细胞荧光强,转染效率高,RT-PCR结果表明转染细胞的polβ表达较空载体转染细胞、对照细胞增加.转染前后细胞生长速度接近,转染细胞周期分布发生改变,多被阻滞在S期,在软琼脂实验中克隆形成率增加,对顺铂的敏感性降低.结论:成功建立了稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞系,polβ的高表达与细胞的细胞周期分布、恶性增殖能力及耐药性有一定关系.
关键词： DNA聚合酶beta 转染 细胞周期 食管癌细胞 四甲基偶氮唑蓝 -
人食管癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药相关基因的筛选
目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,并初步探讨其耐药机制.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇冲击作用方法历时9mon诱导人食管癌细胞系Ec9706,建立相应耐药细胞系,采用MTT法测定耐药细胞系对cD-DP的耐药指数,用RT-PCR半定量方法测定亲本细胞及耐药细胞耐药相关基因如DNA聚合酶(polβ)、多药耐药相关基因(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、拓扑异构酶(TPO)和多药耐药基因(mdr1)等基因的mRNA表达水平.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,该细胞系中polβ、DHFR、GST基因mRNA的表达比亲本细胞显著增加,TPO的表达降低,而mdr1、MRP表达的增加无显著统计学意义.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,其耐药性的产生与polβ、GST、DHFR、TPO等基因的异常表达有关,而与mdr1、MRP表达的关系不密切.
关键词： 食管癌 耐药细胞系 耐药相关基因 DNA聚合酶beta
