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γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对肝癌细胞增殖的影响
[目的]探索γ分泌酶抑制剂MW167阻断Notch信号通路对肝癌细胞增殖的影响.[方法]通过Western blotting和RT-PCR方法检测Notch受体各亚型的表达.用不同浓度(5、10、20μmol/L) MW167处理肝癌细胞,48h后用Western blotting法检测Notch各蛋白的表达,采用RT-PCR法检测Notch信号通路下游基因HES1 mRNA表达,MTT法测定细胞增殖.[结果] HepG2细胞中可检测到Notch1～4蛋白和mRNA的表达.不管是与培养基对照还是DMSO对照相比,不同浓度MW167对Notch1 ～4蛋白的表达没有显著影响.与相应浓度的对照组相比,MW167处理组HES1 mRNA表达下降(P＜ 0.05).随着MW167处理浓度升高,HES1 mRNA表达抑制率逐渐升高(P＜0.05).MTT法检测结果显示,MW167处理的细胞,其吸光度高于对照组(P＜0.05),且随着MW167浓度的升高,细胞增殖率相应升高.[结论]HepG2细胞中可检测到Notch1 ～4蛋白和mRNA的表达,MW167处理可降低HES1 mRNA表达,MW167处理可促进细胞的增殖.
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调控Notch信号通路对胚胎干细胞向心肌细胞分化的影响
目的:观察Notch信号通路调控对胚胎干细胞向心肌细胞分化的影响.方法:实验分为两部分:调控Notch信号通路开关,研究其对胚胎干细胞向心肌细胞分化比例的影响及心肌分化相关蛋白表达的影响.在小鼠胚胎干细胞培养的基础上,加入Notch信号激活剂Jagged蛋白(5 mg/L)或Notch信号抑制剂MW167(100 μmol/L)作用14 d,检测:①自发性节律收缩细胞的出现情况;②心肌特异性收缩蛋白的表达情况,计算胚胎干细胞分化为心肌细胞的比例;③采用Western blot方法检测胚胎干细胞源性心肌细胞中心肌分化相关蛋白(Nkx2.5、GA-TA4、Tbx5、Myocardin)的表达.结果:与对照组(胚胎干细胞自发分化组)相比,加入Jagged蛋白后,胚胎干细胞向心肌细胞分化的比例和早期心肌分化相关蛋白表达水平均显著减少;而加入MW167后,分化比例及早期心肌分化相关蛋白均显著增加.结论:胚胎干细胞中加入Jagged蛋白持续激活Notch信号,抑制了胚胎干细胞向心肌细胞分化;而加入MW167持续抑制Notch信号,则促进了胚胎干细胞向心肌细胞分化.
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Notch受体阻断剂MW167抑制U87胶质瘤细胞增殖的作用研究
目的 探讨Notch受体阻断剂MW167对胶质瘤细胞系U87增殖及凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MW167对体外培养的胶质瘤细胞系U87的增殖抑制作用.流式细胞仪AnnexinV-FITC和PI双染检测凋亡率.结果 MTT法检测显示MW167能明显抑制U87细胞的增殖并呈剂量依赖关系:流式细胞仪检测显示MW167可诱导U87胶质瘤细胞发生凋亡并呈剂量依赖关系.结论 MW167明显抑制U87胶质瘤细胞的增殖并诱导其发生凋亡,提示Noah受体阻断剂MW167对人脑胶质瘤的治疗具有潜在的临床应用价值.
