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消旋聚乳酸支架文献资料
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红/绿色荧光蛋白转染骨髓间充质干细胞在骨支架中的示踪及转归
目的 比较骨髓间充质干细胞(BMSCs)分别转染红/绿色荧光蛋白(RFP/GFP),作为种子细胞在消旋聚乳酸(PDLLA)支架上贴附、增殖、代谢和分化的不同.方法 以佳感染复数(MOI)的Lentivirus-GFP/RFP转染BMSCs,成骨诱导培养后接种于PDLLA骨支架,分为GFP-BMSCs(G组)、RFP-BMSCs(R组)、未经转染的BMSCs作为对照(Control,C组).检测并比较各组种子细胞的代谢活性、贴附、增殖、荧光示踪与成骨分化.结果 G组BMSCs代谢活性持续增强,培养21 d时荧光强度达20 458±1 364;而R组BMSCs代谢活性在培养14 d时达顶峰(12 216±742),培养21 d急剧下降至7 865±1 031.荧光显微镜及扫描电镜下观察,G组与R组BMSCs均能在PDLLA支架上贴附与增殖,G组的增殖、贴附及细胞生长状态明显优于R组.实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)结果显示:随着培养时间延长,各组成骨相关基因骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)的表达均上调,G组和C组表达倍数变化近似,各时间点各基因表达均高于R组(P＜0.01).G组和C组的OCN、ALP和OPN表达均在第21天达到高峰;R组OCN、ALP表达以第14天为高峰(分别为6.00±1.44与2.14±0.58),OPN表达第7天为高峰(5.91±1.20),各基因表达至第21天均明显下调.结论 BMSCs转染GFP,在PDLLA支架上贴附、增殖、代谢和成骨分化均优于转染RFP.
