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缺血再灌注条件下肠上皮细胞来源的骨形成蛋白-4促进肠上皮间淋巴细胞凋亡的研究
目的 探讨小鼠小肠在缺血再灌注(I/R)条件下,肠上皮细胞(IECs)来源的骨形成蛋白-4(BMP-4)促进肠上皮间淋巴细胞(IELs)凋亡及其机制.方法 (1)分离正常小鼠IELs,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证IELs中是否存在BMP受体及经典信号Smad蛋白分子表达.(2)建立小鼠小肠I/R损伤模型,随机分为手术组(I/R)和假手术组(Sham),苏木素-伊红(HE)染色观察肠黏膜绒毛变化;检测IECs中BMP-4蛋白和IELs中BMP受体及Smad磷酸化蛋白变化.(3)分离培养正常小鼠IELs,分别加入外源性BMP-4蛋白及BMP-4拮抗剂NOGGIN蛋白刺激,观察BMP-4对IELs中p-Smad 1/5表达变化和IELs凋亡的影响.结果 正常IELs中存在BMP受体[骨形成蛋白IA受体(BMPRIA)、骨形成蛋白IB受体(BMPRIB)]及N-Smad(Smad1、Smad5、Smad8)蛋白的表达,I/R组肠黏膜损伤与IECs中BMP-4表达较Sham组明显增加;在I/R刺激下,IELs中BMP受体和磷酸化Smad1/5(p-Smad1/5)均较Sham组表达增加[BMPRIA:(12.66±4.89)％,BMPRIB:(16.70±5.06)％,p-Smad1/5:(44.10±10.10)％,P＜0.05];体外培养实验发现:IELs单独培养给予BMP-4刺激后p-Smad较空白对照组增加[(29.10±9.09)％,P＜0.05]和IELs的凋亡率较空白对照组增加[(20.30±5.43)％,P＜0.05],NOGGIN可拮抗BMP-4诱导的Smad磷酸化和IELs凋亡率的增加.结论 小肠在I/R条件下,肠上皮细胞中BMP-4蛋白分泌表达增加,通过与IELs上的BMP受体结合,进而激活IELs内的Smad信号通路途径促进IELs的凋亡,从而加重肠屏障损伤.
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肠上皮间淋巴细胞与慢性末端回肠炎的相关性分析
目的 观察肠上皮间淋巴细胞与慢性末端回肠炎的关系.方法 经结肠内镜及病理学确诊,收集部位相同的慢性末端回肠炎组织共49例,男34例,女15例,平均年龄33.0岁,其中轻度17例,中度16例,重度16例.正常对照组10例,男5例,女5例,平均年龄34.5岁.分别对两组肠上皮间淋巴细胞计数和末端回肠的炎症浸润程度分级并进行对比分析.结果 ①临床症状的轻重与内镜、病理学下炎症程度无明显相关.②肠上皮间淋巴细胞的计数与内镜下慢性末端回肠炎的炎症程度成正相关(P<0.01).③肠上皮间淋巴细胞计数与病理学炎性细胞浸润程度成正相关(P<0.01).结论 肠上皮间淋巴细胞可能在慢性末端回肠炎发病及致病过程中发挥重要作用.
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姜黄素通过调节肠道IEL亚群缓解DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎
目的 观察传统中药成分姜黄素对葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的炎症状况及IEL亚群的影响,探讨姜黄素对治疗溃疡性结肠炎的可能机制.方法 选取成年雄性C57BL/6小鼠60只,按照随机数字表法分为3组,每组20只,分别为正常组、DSS组和DSS+姜黄素组,通过对小鼠疾病活动程度指数(disease activity index,DAI)评分及结肠组织HE染色评估炎症状况,应用流式细胞术分析各组结肠IEL亚群.结果 与正常组对比,DSS组DAI评分明显升高(P＜0.01);结肠黏膜损伤程度明显加重;CD8αd和TCRγδ亚群比例降低(P＜0.01),CD4亚群比例升高(P＜0.05).而与DSS组比较,DSS+姜黄素组DAI评分明显降低(P＜0.05);结肠黏膜损伤程度明显减轻;CD8αα和TCRγδ亚群比例升高(P ＜0.01);CD4亚群比例降低(P＜0.05).结论 姜黄素缓解DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎可能通过调节IEL亚群变化.
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在肠缺血再灌注下骨形成蛋白-4下调IL-7/IL-7R信号促进肠上皮间淋巴细胞凋亡的研究
目的 探讨小鼠小肠在肠缺血再灌注(I/R)条件下骨形成蛋白(BMP-4)通过下调IL-7/IL-7R信号通路促进IELs凋亡的机制.方法 建立小鼠小肠I/R损伤模型,随机分为手术组(I/R组)、假手术组(Sham组),每组各16只,免疫荧光检测IECs中IL-7蛋白和流式细胞术检测IELs中IL-7受体(CD127)及STAT5蛋白磷酸化水平变化;外源性BMP-4蛋白刺激IEC-6培养6小时后,Western blot检测IEC-6中IL-7蛋白表达变化;分离培养正常小鼠IELs,分别加入外源性BMP-4蛋白及BMP4拮抗剂NOGGIN蛋白刺激,流式细胞术观察BMP4对IELs中IL-7受体(CD127)及STAT5蛋白磷酸化变化;分离培养正常小鼠IELs,分别加入外源性BMP-4蛋白及IL-7蛋白刺激,观察IELs凋亡率的变化.结果 在I/R刺激下,IECs中IL-7蛋白表达I/R组较Sham组明显减少(P＜0.05);IELs中IL-7受体(CD127)及STAT5蛋白磷酸化水平均较Sham组表达减少(P＜0.05);体外培养实验发现:IECs中IL-7蛋白表达在BMP-4刺激下明显减少,IELs单独培养给予BMP4蛋白刺激后CD127及P-STAT5较Sham组减少(P＜0.05);给予BMP特异性拮抗剂RNOGGIN可逆转BMP对IL-7/IL-7R信号通路的抑制作用;BMP-4促进IELs的凋亡率增加(P＜0.05),给予外源性IL-7蛋白刺激后,有效的抑制IELs的凋亡率增加(P＜0.05),BMP-4抑制IL-7对IELs的增殖作用,促进IELs的凋亡.结论 小肠在I/R条件下,肠上皮细胞中BMP-4蛋白抑制IL-7/IL-7R信号通路,使IELs的保护性细胞因子减少,从而促进IELs的凋亡率增加,进一步加重肠免疫屏障损伤.
