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转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗刺激脾细胞产生细胞因子的研究
目的 研究转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗体外刺激同系小鼠脾细胞产生细胞因子(IL-2、TNF-α和GM-CSF)的能力.方法 以丝裂霉素C(MMC)处理高表达转m4-1BBL基因的小鼠Hepa1-6肝癌细胞,制成肿瘤细胞瘤苗(TCV),体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养后,观察其对脾细胞产生细胞因子(IL-2、TNF-α和GM-CSF)的影响.结果 TCV4-1BBL刺激后,脾细胞体外分泌细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF的水平明显增高.结论 转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗能刺激脾细胞产生细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF.
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小鼠4-1BBL基因真核表达载体构建及其在前列腺癌细胞中的表达
目的:构建含小鼠4-1BBL编码区cDNA序列的真核表达载体,并检测其在前列腺癌细胞株(PC-3)中的表达.方法:将目的基因m4-1BBL全长cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),获得m4-1BBL定向插入重组子pcDNA3.1(+)m4-1BBL,采用限制性内切酶和测序鉴定是否成功构建.用脂质体法将重组质粒转入PC-3细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测m4-1BBL在PC-3中的表达.结果:酶切鉴定和序列分析证实,重组质粒含有小鼠4-1BBL全长cDNA编码序列,转染实验表明m4-1BBL基因能在PC-3细胞中表达.结论:小鼠4-1BBL全长cDNA基因真核表达载体构建及其在PC-3细胞中的表达均获成功,为进一步研究莫定了基础.
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小鼠4-1BBL基因真核表达载体构建及其在COS-7细胞中的表达
目的:构建含小鼠4-1BBL编码区cDNA序列的真核表达载体,并检测其在COS-7细胞中的表达.方法:将目的基因4-1BBL克隆入pUC19载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定. 亚克隆入真核质粒pIRES2-EGFP,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-m4-1BBL. 用脂质体法将重组质粒转入COS-7细胞,以RT-PCR和观察细胞内荧光的方法检测m4-1BBL的表达.结果:酶切鉴定和序列分析证实,重组质粒含有人4-1BBL全长cDNA编码序列,转染实验表明4-1BBL基因能在COS-7细胞中表达. 结论:鼠4-1BBL全长cDNA基因真核表达载体构建及其在COS-7中的表达均获成功,为进一步研究奠定了基础.
