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微缺氧对三氧化二砷抑制胃癌细胞SGC-7901生长的影响
目的常氧和微缺氧条件下三氧化二砷(As2O3)注射液对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制作用的对比研究.方法运用产气袋法(GasPaK)制造微缺氧条件,实验分为微缺氧组和对照组,用MTT法检测药物效应.流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡.结果不同浓度As2P3对人胃癌细胞株SGC-7901生长有抑制作用,并呈剂量-效应关系.细胞滞留于G2/M及S期.微缺氧条件下As2O3对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制作用下降(P＜0.01).凋亡细胞百分比下降.结论As2O3对人胃癌细胞生长有抑制作用,但对缺氧胃癌细胞的抑制作用下降,单用As2O3治疗胃癌存在一定的局限性.
关键词： 微缺氧 三氧化二砷 人胃癌细胞SGC-7901 凋亡 -
骨桥蛋白反义寡核苷酸对体外微缺氧诱导的肿瘤新生血管的影响
目的 观察靶向骨桥蛋白(OPN)的反义寡核苷酸(ASODN)对微缺氧下HT-29细胞体外促进新生血管形成能力的影响,探讨OPN与微缺氧诱导的肿瘤新生血管的关系.方法 合成靶向OPN的ASODN,以Lipofectamine为载体,将其转染入微缺氧下高表达OPN的HT-29细胞.RT-PCR和Western blot分别检测转染细胞微缺氧下OPNmRNA和蛋白的表达；明胶酶谱分析检测分泌的MMP-2/MMP-9活性变化;内皮细胞小管形成试验检测体外促进新生血管形成的能力.提取胞核蛋白,Western blot检测胞核内NF-kB/p65蛋白表达.结果 微缺氧诱导的OPNmRNA和蛋白表达被靶向OPN的ASODN特异性地抑制,表达量分别是对照组的35.4%和31.5%.ASODN组HT-29细胞明胶酶活性下降71.0%,内皮细胞形成管状结构的数仅为(12.4±1.8)；胞核内的NF-κB/p65蛋白表达下调了61.2%.与各对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 靶向OPN的ASODN明显抑制微缺氧诱导的OPNmRNA和蛋白表达,显著下调微缺氧诱导的HT-29细胞分泌MMP-2/MMP-9的活性,显著桔抗新生血管形成.阻抑OPN的表达,胞核内NF-κB/p65表达、MMP-2/MMP-9的活性随之下调,提示NF-κB和MMP-2/MMP-9也可能参与微缺氧诱导的恶性转化,并且是OPN的下游调控基因.
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微缺氧对人结肠癌细胞HT-29血管生成能力及分泌基质金属蛋白酶2/9活性的影响
目的 观察HT-29细胞在微缺氧下的血管生成能力,检测OPN的表达和MMP-2/MMP-9的活性变化,以探讨其向恶性表型转化的潜在机制.方法 参照体内肿瘤的氧分压,建立微缺氧模型.内皮细胞小管形成试验检测体外促进新生血管形成的能力.将HT-29细胞微缺氧处理0、6、12、24和48 h,明胶酶谱分析检测分泌的MMP-2/MMP-9活性变化,RT-PCR和Western blot检测OPN的mRNA和蛋白表达.结果 微缺氧组内皮细胞形成的管状结构数为(28.5±3.6),明显多于对照组(12.4±2.8),其差异具有显著性(P<0.01).微缺氧6h,MMP-2/MMP-9活性无明显变化,随着微缺氧时间的延长,其活性逐渐上调,24h达顶峰,48 h与24 h差异无显著性.HT-29细胞在微缺氧的诱导下,其OPN mRNA和蛋白的表达趋势与MMP-2/9活性变化趋势类同.结论 微缺氧能诱导HT-29细胞促进新生血管形成,上调MMP-2/MMP-9活性而促进其向恶性表型转化.该实验检测到在微缺氧下OPN和MMP-2/MMP-9普遍上调,且时限同步.因此,笔者推测:OPN可能是微缺氧下继HIF-1α之外的另一重要调控因子,该调控因子与微缺氧诱导的恶性表型密切相关.
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人结肠癌细胞HT-29血管生成能力与微缺氧的关系
目的 观察HT-29细胞在微缺氧下的血管生成能力,检测OPN的表达,以探讨其向恶性表型转化的潜在机制.方法 参照体内肿瘤的氧分压,建立微缺氧模型.内皮细胞小管形成试验检测体外促进新生血管形成的能力.将HT-29细胞微缺氧处理0,6、12、24、48小时,RT-PCR和Western blot检测OPN的mRNA和蛋白表达.结果 微缺氧组内皮细胞形成的管状结构数为(28.5±3.6),明显多于对照组(12.4±2.8),差异具有统计学意义(P<0.01).微缺氧6h,HT-29细胞OPN的mRNA和蛋白无明显变化,随着微缺氧时间的延长,其表达逐渐上调,24h达顶峰,48h与24h无显著差异.结论 微缺氧能诱导HT-29细胞促进新生血管形成,而促进其向恶性表型转化.微缺氧下OPN普遍上调,OPN可能是微缺氧下继HIF-1α之外的另一重要调控因子,该调控因子与微缺氧诱导的恶性表型密切相关.
