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外源性TRAIL基因转染联合氯喹诱导胶质瘤U251细胞凋亡
目的 探讨外源性肿瘤坏死因子凋亡相关诱导配体(TRAIL)联合氯喹对U251细胞凋亡的作用.方法 构建稳定表达TRAIL的质粒pEGFP-TRAIL,然后转染到胶质瘤细胞系U251细胞中(TRAIL组),以pEGFP-C1质粒为阴性对照,以不转染质粒为空白对照;将氯喹(50μmol/L)加入到转染pEGFP-TRAIL质粒U251细胞培养基中,作为联合组.共聚焦显微镜检测GFP-TRAIL蛋白表达,MTT法检测细胞抑制率,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,免疫印迹法检测GFP-TRAIL和Cleaved caspases-8蛋白表达.结果 质粒转染后,共聚焦荧光显微镜检测结果 显示,pEGFP-C1在细胞质中成弥散分布;而GFP-TRAIL在细胞质中成聚点分布,且荧光表达可以持续48 h以上;免疫印迹法分析结果 显示TRAIL组TRAIL蛋白表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).联合组细胞增殖抑制率[(47.22±0.15)%]明显高于阴性对照组[(3.21±0.04)%,P<0.05]和TRAIL组[(23.88±0.22)%,P<0.05].联合组细胞凋亡率[(41.62±0.44)%]明显高于空白对照组[(2.14±0.09)%,P<0.05]、阴性对照组[(3.46±0.17)%,P<0.05]和TRAIL组[(22.48±0.43)%,P<0.05].联合组Cleaved caspases-8蛋白表达水平明显高于阴性对照组、TRAIL组(P<0.05).结论 外源性TRAIL基因转染后可以在细胞中稳定表达并诱导细胞凋亡,与氯喹联合应用可以增强TRAIL诱导的细胞凋亡,其机制可能是氯喹抑制细胞自噬.
