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梅毒螺旋体Tp0453-Tp0257重组融合蛋白的表达及作为梅毒诊断候选抗原的初步研究
目的 本研究旨在探讨梅毒螺旋体Tp0453-Tp0257重组融合蛋白检测梅毒感染的可能性.方法 用基因合成的方法构建重组pET-28a-Tp0453-Tp0257质粒,重组融合蛋白的鉴定用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,重组融合蛋白作为抗原用于ELISA实验,该蛋白的灵敏度用来自一期、二期、三期和隐性梅毒患者的血清(90例)进行评估,其特异性用正常体检者的血清(120例)评估.结果 Western Blot分析证实了Tp0453-Tp0257重组融合蛋白能与梅毒阳性血清反应.该蛋白对梅毒诊断的总灵敏度为97.8％、总特异性为100.0％.结论 本实验Tp0453-Tp0257重组融合蛋白作为新的梅毒特异诊断的候选抗原,取得较好的实验效果,有望进入临床推广使用.
关键词： 梅毒 Tp0453 Tp0257 重组融合蛋白 酶联免疫吸附试验(ELISA) -
梅毒螺旋体特异性抗原Tp0453及其截短蛋白的克隆、表达及活性检测
目的:克隆和鉴定梅毒螺旋体(Tp)特异性抗原Tp0453及其截短蛋白(Tp0453-s),并用梅毒患者血清检测抗原反应性.方法:PCR扩增Tp0453和Tp0453-s基因,分别构建重组表达质粒pGEX-6P1-Tp0453和pET-28a(+)-Tp0453-s,经测序鉴定正确后转染E.coli BL21 (DE3),对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定.用不同分期梅毒患者血清作为一抗,Western blot检测抗原反应性.结果:经鉴定,2个原核表达质粒均构建成功,SDS-PAGE电泳和Western blot结果显示2个蛋白大小与预期一致.Western blot检测显示2个蛋白均与梅毒患者血清特异性结合,而与非梅毒患者血清无交叉反应.结论:成功克隆、表达并纯化了Tp0453和Tp0453-s蛋白,2个蛋白均有良好的抗原反应性.
关键词： 梅毒螺旋体 外膜蛋白 Tp0453 Western blot -
梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达纯化及免疫活性研究
目的表达梅毒螺旋体膜蛋白Tp0453(28-288aa),纯化表达产物并进行免疫活性分析,为探索Tp0453重组蛋白在梅毒血清学诊断中的应用提供实验依据.方法通过生物信息学分析,挑选Tp0453抗原的优势表位,进行诱导表达;以Western-blot和间接ELISA法检测重组蛋白的免疫反应性;用重组蛋白免疫新西兰家兔,评价其免疫原性.结果纯化后获得了相对分子量约为32×103的融合蛋白.Western-blot检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;同时以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,检测梅毒诊断试剂参考血清,其阴阳性符合率均为100%.用纯化的Tp0453重组蛋白免疫新西兰家兔,能诱导其产生特异性免疫应答,ELISA法测定免疫血清中特异性抗体滴度在1:1280以上.结论基因重组表达的Tp0453重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用和其生物学功能奠定了基础.
