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脂蛋白脂肪酶内含子3C→T突变
为筛查中国人群脂蛋白脂肪酶基因的突变情况,并探讨这些突变对脂蛋白代谢可能产生的影响,研究者利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术,对140例人群(高甘油三酯血症组51例,正常对照组89例)的脂蛋白脂肪酶基因进行了突变筛查,对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定.结果在外显子4扩增片段(包括内含子-外显子交界区)有2例可疑突变被检出,经测序证实均为内含子3受位剪接位点上游6 bp的C→T转换突变杂合子.由于该突变仅见于重度高甘油三酯血症患者,结合国内外相关文献,研究者认为我国人群存在脂蛋白脂肪酶基因内含子3受位剪接位点的C→T突变,该突变可能是我国人群高甘油三酯血症的遗传易患因子.
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热性惊厥相关癫痫SCN1A基因内含子突变对mRNA剪切的影响及其与临床表型的关系
目的 研究与热性惊厥相关癫痫中不同临床表型相关的SCN1A基因内含子突变对mRNA剪切的影响,探讨其剪切模式与临床表型-基因型-遗传模式的关系. 方法 采用Minigene体外剪切分析技术,对来自热性惊厥相关癫痫谱中的部分性癫痫伴热性惊厥附加症(PEFS+)和Dravet综合征(DS)患者的5个SCN1A基因内含子突变配对分组后进行分子克隆、HENK293细胞体外表达,应用逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)对各突变的mRNA剪切形式及其相对表达量进行定性定量分析. 结果 (1)RT-PCR显示DS相关突变c.602+1G＞A和c.4853-1G＞C均出现mRNA异常外显子丢失,且未见明确正常剪切mRNA;而PEFS+相关突变c.473+5G＞A、c.473+5G＞C和c.4853-25T＞A表现为外显子删除或内含子插入,正常和异常mRNA转录共存.(2)qPCR显示PEFS+相关突变c.473+5G＞A和c.473+5G＞C的异常mRNA的相对表达量分别为4.92％±1.05％和7.97％±1.12％,正常mRNA的相对表达量分别为6.10％±0.21％和3.94％±1.25％,分别与DS相关突变c.602+1G＞A的异常和正常mRNA的相对表达量(60.51％±1.81％和0.060％±0.022％)比较差异均有统计学意义(P＜0.05);PEFS+相关突变c.4853-25T＞A的正常和异常mRNA的相对表达量分别为71.22％±11.92％和7.38％±1.61％,分别与DS相关突变c.4853-1G＞C的正常和异常mRNA的相对表达量(0.08％±0.01％和22.1 1％±2.83％)比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 SCN1A基因内含子突变位置、剪切模式的差异是导致热性惊厥相关癫痫遗传模式和临床表型差异的潜在分子机制.
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O新等位基因与B抗原弱表达的研究
目的 对检测中遇到的1例ABO正反定型不符的献血者标本进行血清学和分子生物学鉴定并对其机制进行分析.方法 常规血清学检测;PCR扩增直接测序和克隆测序分析其单体型.结果 血清学结果为B弱;直接测序和克隆测序结果为O01/O05,O01 IVS6-25 A＞G突变.结论 第一次证实了O等位基因血清学可以表现为B型,对其机制仍需深入研究.
