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微流体芯片技术在ABO血型基因分型中的应用
本研究建立一种简单、可靠的ABO基因检测结果报告评估方法.利用微流体芯片检测技术代替凝胶电泳,通过对实验条件的优化,进行multiplex-PCR-RFLP的ABO基因分型结果判读,并通过对150份标本进行测试,对该检测方法的稳定性和准确性进行评估.结果显示,全部检测结果与血清学分析结果一致,并且检测出1例因肿瘤引起的B型抗原减弱病例.结论:建立的微流芯片基因检测系统稳定、可靠,实现了ABO基因分型检测结果的客观化、标准化和自动化.
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罕见B(A)血型的血清学及基因检测研究
本研究旨在通过血清学和分子生物学方法研究1例ABO血型系统中罕见B(A)型,并分析造成多次检测结果不一致的原因.采用血型血清学方法鉴定ABO血型血清型,同时采用PCR测序方法检测其基因型.结果表明,该献血者血清学结果正反定型结果不符,正定型AB型,反定型B型,ABO基因型为B(A) 04/O01型,存在nt640A＞G点突变,导致214位甲硫氨酸被缬氨酸置换.结论:对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可用分子生物学方法进行辅助验证,并能阐述ABO血型弱表达现象的分子基础.
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RASSF1A在无损性孕妇外周血浆中胎儿ABO基因分型中的运用
目的:探讨甲基化表观遗传标志RASSF1A在O型孕妇外周血浆中胎儿ABO基因分型中的运用,以无损性预测产前胎儿ABO血型.方法:首先提取O型孕妇外周血浆游离DNA,扩增SRY及甲基化RASSF1A作为胎儿DNA存在的标志;检测血浆游离DNA中B及非O预测胎儿ABO血型;并将基因分型结果与胎儿分娩后血清学结果进行比对,以评价该方法的准确性.结果:20例标本中,11例检测出SRY,检测结果与胎儿出生后性别相符;其余9例标本酶切后均扩增出RASSF1A,证实胎儿游离DNA存在.对血浆游离DNA进行ABO基因检测,20例标本中8例标本同时扩增出非O和B,提示为B血型;5例标本只扩增出非O,未扩增出B,提示为A型;7例标本均未扩增出非O及B,提示为O型.上述预测结果与胎儿出生后ABO血清学血型一致.结论:初步建立了基于RASSF1A的O型孕妇血浆中游离DNA中胎儿ABO基因的检测程序,可用于临床无损性产前胎儿ABO血型的预测.
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罕见B(A)血型的检测及其安全输血探讨
本研究探讨稀有B(A)血型的遗传特性、鉴定方法和输血策略.采用血型血清学方法、PCR-SSP方法基因定型和ABO血型第6、7外显子直接测序的方法进行B(A)血型鉴定,并分析该家系的血型遗传特点和分子机制；同时对B(A)型献血者和用血者进行配合性试验和临床输血研究.结果表明,该家系调查发现3例血清学结果正反定型结果不符,均为血清学结果为正定型AB型,反定型B型,ABO基因型为B(A)04/O01型,1袋B(A)型红细胞输注给1例B型患者后临床有轻度的输血反应,B(A)型患者输注O型洗涤红细胞后患者未出现输血反应.结论:对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,B(A)型血液不能给B型或AB型患者输注,B(A)血型患者输血时应采取配合性成分输血或自身输血.
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1例罕见B(A)血型鉴定及其临床安全输血策略初探
目的 鉴定罕见B(A)血型并探讨其临床安全输血策略.方法 利用全自动血型分析仪检测ABO血型,发现正反定型不符的一位患者,利用血型血清学和分子生物学方法对该患者及其家系中9位成员进行血型鉴定和ABO血型基因测序,分析该家族血型的遗传特点;并对该血型的患者进行临床输血探讨,确保临床输血安全.结果患者为B(A)血型,与B101基因序列比对,均为nt640A>G,基因型鉴定为B(A)04/O01,B(A)型血清与同型红细胞以及O型、B型红细胞不凝集,B(A)型红细胞与同型以及AB型血清不凝集.结论 血型血清学方法可以对正反定型不符的B(A)血型做出初步判断,分子生物学技术可以进一步准确判断该血型;临床输血应采取自体输血、同型输注及配合相容性输血.
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罕见cisAB血型家族的遗传学分析
目的 cisAB是一种罕见的ABO表型,常表现为正反定型不符.文中对1例在常规血型鉴定中发现的罕见cisAB血型及其家族成员进行鉴定.方法 抽取先证者及其家族成员共计7人的外周抗凝血液,采用试管法分析血型血清型;以PCR-SSP基因分型法和直接测序法分析这些样本的ABO基因.结果 血清学方法证实该家系6份样本的红细胞都有接近正常的A抗原和较弱的B抗原,血清中含有弱的抗-B抗体.PCR-SSP基因分型显示该6份样本均为cisAB01型.ABO基因测序结果:6份样本的第7外显子均存在467C>T和803G>C点突变;在第6外显子,先证者出现261delG和297G>A,2例标本出现261delG和297AA,3例标本表现为只有297AA.结论 该家系6名成员的表型均为cisAB01型,先证者基因型为cisAB/O02.
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60名上海汉族人群ABO血型系统基因型研究
目的建立ABO血型系统基因分型方法,研究上海汉族人群ABO血型的基因型分布,并对A等位基因进行较为深入的研究. 方法采用多重聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)方法,单管扩增ABO基因第6和第7外显子,然后用KpnI和MspI两种限制性内切酶同时消化多重PCR产物. 结果在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(60人)中,检出A102、A101、B、O1四种等位基因,其基因频率分别为20.8%、2.5%、24.2%、52.5%.基因型频率为BB 10.0%、O1O1 21.7%、A102A102 1.7%、A101A102 1.7%、A102O1 33.3%、A101O1 3.3%、BO1 25.0%、A102B 3.3%,未检测到O2基因.3名血清学疑为A2亚型的个体中有1名经PCR-序列特异性引物(SSP)法证实存在A467(C→T)及1 060位单个碱基C缺失的移码突变. 结论上海汉族人群A型以A102占优势.
关键词： ABO基因分型 A2亚型 多重PCR 限制性片段长度多态性 -
B(A)04血型鉴定及家系分析
目的 鉴定1例B(A)血型并对其进行家系调查分析.方法 采用血型血清学方法对10例家系样本进行ABO血型鉴定,正反定型不符的样本采用ABO血型基因检测及cisAB与B(A)血型基因分型等分子生物学方法检测,并分析血型遗传规律.结果 10例样本中8例ABO正反定型相符,2例样本ABO血型正反定型结果不相符,均是正定型为AB型,反定型一个是O型,另一个是B型.这2例ABO基因型为B(A)04/O1型和B(A)04/B型.结论 对ABO血型血清学正反定型不符的样本,可以采用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,阐述ABO血型抗原弱表达现象的分子基础.
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ABO亚型B（A）04的鉴定及分子机制研究
目的：研究B(A)04血型的特性，为B(A)04血型的临床输血提供理论基础。方法应用血型血清学技术和基因分型技术鉴定B(A)04血型的特性，采用PCR方法扩增其ABO基因7个外显子、侧翼内含子，PCR 产物采用直接测序和克隆测序方法，以确定B(A)血型的分子机制。结果血型血清学有相应的反应格局，患者正定型： A弱B，反定型： A1c 2+，Bc阴性，ABO基因测序发现第7外显子640位碱基发生A>G突变，导致214位蛋氨酸被缬氨酸替换，ABO血型基因型为ABO*B(A)04/O01。结论亚型或稀有血型的鉴定分析要慎重，必要时应用血型基因分型技术辅助定型，保障输血安全。
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中国汉族人群ABO血型系统基因分型研究与应用
目的研究中国汉族人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题.方法快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用PCR-SSP法扩增疑难ABO血型的等位基因.结果在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1、B、A101(A267c)和A102/103(A467r)四种等位基因,其基因频率分别为0.5827、0.1846、0.0096、0.2231.在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中,只有2例基因分型确定为A201O1,其余均为A102/A103O1型,在一家系疑难血型鉴定中,兄弟三人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A102B、A102B、A102O1.结论ABO RCR-SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,与血型血清学相比有着显著优势.研究发现中国汉族人群A2等位基因构成与国际报道的基因构成存在差异.
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罕见B(A)亚型的血清学特点及分子机制的探究
目的:研究罕见B(A)血型的血清学特性和分子机制,为B(A)血型的临床输血提供理论基础.方法:采用血型血清学方法、PCR-RELP基因分型和血型第6、7外显子直接测序的方法进行B(A)血型鉴定,并分析B(A)血型的分子机制及遗传规律.结果:4例B(A)血型病例中,1号和4号病例为B(A)* 04型,B等位基因在正常B* 101基础上第7个外显子发生了640A＞G突变;2和3号病例以及2号的儿子为B(A)* 02型,B等位基因发生单碱基错义突变700C＞G.结论:当ABO血型正反定型不一致或血型血清学检测结果不符合孟德尔遗传规律时,可通过亚型血清学分析,采用分子诊断技术和家系调查辅助诊断,进行正确的血型鉴定,选择合适的血液制品进行输注,为临床输血提供安全保障.
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急性白血病导致A抗原减弱1例
血型是由遗传基因所决定的,人的一生中血型一般是不会改变的,但由于某些疾病的影响,可导致血型抗原减弱,国内国外均有报道.笔者在配血实验中发现1例急性淋巴细胞白血病患者的正反定型不符,现报告如下.
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基因分型技术首次应用于类孟买型家系ABO基因的研究
目的探讨将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题. 方法报告首次在国内用基因分型技术用于一个类孟买型家系5口人ABO基因多态性的研究.在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,采用快速盐析法提取外周血中的DNA,用PCR-SSP法扩增ABO血型等位基因. 结果一家5人中,兄弟3人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A102B、A102B、A102O1,而其父母血型基因与血清学血型相符合. 结论ABO PCR-SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,与血型血清学相比有着显著优势.
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新疆维吾尔族人群ABO基因多态性的研究
目的 研究中国新疆维吾尔族人群ABO基因多态性分布.方法 对新疆维吾尔族随机群体160人份血样进行DNA抽提,采用聚合酶链反应-序列特异性引物方法对ABO血型定型,疑难的ABO基因采用直接序列测定.结果 160人中检出A101、A102、A201、A205、B01、001 6种等位基因,其基因频率分别为0.2062、0.0563、0.0156、0.0031、0.1875、0.5312.结论 阐明中国新疆维吾尔族人群的ABO基因结构的特点,提示中国维吾尔族人群与汉族人群间遗传多态性存在着较大程度的区别,既具有差异性又具有融合性.
关键词： ABO基因分型 聚合酶链反应-序列特异性引物 序列测定 基因频率 维吾尔族 -
ABO血型亚型的血清学及分子生物学分析
目的 探讨2例ABO血型亚型个体ABO血型亚型的血清学和分子生物学机制.方法 选择分别于2015年10月21日和2015年11月12日,送青岛市中心血站输血研究所进行ABO血型鉴定的2例疑难血型全血标本为研究对象.采用血清学正反定型试验和吸收放散试验方法,对2例标本进行ABO血型鉴定;采用PCR-序列特异性引物(SSP)法对标本进行ABO基因分型检测,并对其ABO基因第6、7外显子的核苷酸序列进行直接测序,对ABO基因第6、7外显子及第6内含子进行单倍型测序.结果 ①1例标本的血清学鉴定为Ael型;直接测序结果显示,其ABO基因第7外显子存在c.940A＞G杂合突变;单倍型测序结果显示,ABO基因型为Ax13/O02;②另1例标本的血清学鉴定结果为Bel型;直接测序结果显示,其ABO基因第7外显子存在c.784G＞A杂合突变;单倍型测序结果显示,其ABO基因型为Bw17/O01.结论 血清学分型和基因测序分型相结合的方法,是对疑难血型个体ABO血型亚型进行分型较为可靠的方法.
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1例B(A)02鉴定报告
目的 对检验过程中发现的一例特殊血型进行鉴定,并对结果进行分析.方法 采用血型血清学进行ABO血型正反定型试验,并根据需要追加红细胞与抗血清吸收放散试验和血浆中血型物质检测.并利用PCR-SSP方法来检测其ABO基因及进行人红细胞ABO cisAB与B(A)血型基因分型检测,同时对DNA序列进行分析.结果 在该患者体内发现B(A)02基因,且血清学有相应的反应格局.结论 对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用分子生物学方法进行辅助验证.
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Aend亚型鉴定1例
患者,女,28岁,汉族,孕28周,自述无流产、输血史.2010年5月因常规产前检查就诊本市妇幼保健院,临床未能确定其ABO血型,故来本中心鉴定.经相关血清学检测,判定患者ABO血型为罕见的Aend型,现报道如下.1 材料与方法1.1 试剂与仪器抗-A、抗-B试剂、抗-H试剂(上海血液生物,批号:20100102、20091008);抗-A1、抗-AB试剂、A2红细胞(美国IMMUCOR,批号:8K2138、302011A、112612);ABO标准红细胞(本室自制);ABO基因分型PCR-SSP检测试剂盒(天津秀鹏,批号:B0909);DNA提取试剂盒(北京TIANGEN,批号:J8107).KA-2200型离心机(日本久保田);ABI-9700型DNA扩增仪(美国ABI);KST-5500型紫外凝胶成像系统(北京东讯天地).1.2方法血型血清学检测参考文献[1].ABO血型基因分型按照PCR-SSP试剂盒操作说明进行.
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ABO亚型B(A)04鉴定及家系调查
目的 对罕见的ABO亚型标本进行ABO血型鉴定及家系调查分析.方法 采用血型血清学方法对家系标本进行ABO血型鉴定,同时采用PCR-SSP方法检测红细胞ABO血型基因及ABO cisAB与B(A)血型基因分型,并分析血型遗传规律.结果 该家系调查发现2例血清学结果正反定型结果不符,均为血清学结果为正定型AB型,反定型B型,ABO基因型为B(A)04/O2型.结论 对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,并能阐述ABO血型弱表达现象的分子基础.
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cisAB03血型鉴定及家系分析
目的 对罕见的ABO亚型标本进行ABO血型鉴定及家系调查分析.方法 采用血型血清学方法对家系标本进行ABO血型鉴定,正反定型不符的标本采用ABO血型基因检测及cisAB与B(A)血型基因分型等分子生物学方法,并分析血型遗传规律.结果 该家系调查发现2例血清学结果正反定型结果不符,1例血清学正定型为AB型,反定型为O型,ABO基因型为cisAB03/O<,2>型.另1例标本正定型为AB型,反定型为B型,ABO基因型为cisAB03/B型.结论 对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,并能阐述ABO血型弱表达现象的分子基础.
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O新等位基因与B抗原弱表达的研究
目的 对检测中遇到的1例ABO正反定型不符的献血者标本进行血清学和分子生物学鉴定并对其机制进行分析.方法 常规血清学检测;PCR扩增直接测序和克隆测序分析其单体型.结果 血清学结果为B弱;直接测序和克隆测序结果为O01/O05,O01 IVS6-25 A＞G突变.结论 第一次证实了O等位基因血清学可以表现为B型,对其机制仍需深入研究.
