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不同无血清培养方式提取SHG44人脑胶质瘤干细胞的比较研究
目的 筛选较理想的SHG44人脑胶质瘤干细胞的培养方法.方法 采用无血清培养基(含EGF、FGF、B27)以培养皿、培养瓶及悬浮细胞培养板为载体培养SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133、Nestin联合Bcl-2标记进行免疫荧光鉴定,并对比其倒置显微镜下细胞形态及干细胞球的形态、大小及数目.结果 培养皿和培养瓶初次富集的SHG44胶质瘤干细胞球呈较大不规则形,经二、三次纯化后发现第二与三次纯化后的大部分胶质瘤干细胞呈不规则分化状,大部分胶质瘤干细胞球呈分散、较小、不规则形生长,但第三次比第一、二次有更少的胶质瘤干细胞球却呈更规则球形生长;悬浮细胞培养板提取、纯化的干细胞呈类圆形,基本全部形成胶质瘤干细胞球,且第三次比第一、二次纯化的干细胞球呈更大更规则球形生长;经统计分析悬浮培养板培养纯化的胶质瘤干细胞球较培养皿和培养瓶纯化的胶质瘤干细胞球大且数目多(P＜0.05);对于悬浮培养板,随着纯化次数增加,胶质瘤干细胞球更大、数目更多(P＜0.05),且呈更规则球形.结论 无血清培养基以悬浮细胞培养板为载体纯化胶质瘤干细胞是较理想的方法.
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SHG44人脑胶质瘤干细胞的提取、纯化与鉴定
目的:探讨SHG44人脑胶质瘤干细胞的提取、纯化与鉴定方法.方法:采用以6孔悬浮细胞培养板为载体的无血清DMEM/F12培养基(含EGF、FGF、B27)提取与纯化SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133联合Nestin标记进行免疫荧光鉴定,并在倒置显微镜下观察细胞形态及干细胞球的形态、大小及数目.结果:SHG44人脑胶质瘤干细胞能在含无血清DMEM/F12培养基的6孔悬浮细胞培养板中存活、增殖并形成干细胞球;悬浮培养3d初步形成呈巢状悬浮生长的胶质瘤干细胞团,7d后干细胞球大小、形态基本不变.经统计分析,悬浮培养板培养纯化的胶质瘤干细胞球,随着纯化次数增加,胶质瘤干细胞球更大、数目更多(P＜0.05),且呈更规则球形.结论:本研究成功提取、纯化、鉴定出SHG44胶质瘤干细胞,并进行传代扩增培养;Cyagen悬浮细胞培养板可作为筛选胶质瘤干细胞的理想载体.
关键词： SHG44胶质瘤干细胞 无血清悬浮培养 悬浮细胞培养板 CD133 巢蛋白
