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人巨细胞病毒重组PP150的原核表达及其酶联免疫吸附试验检测
目的 探讨人巨细胞病毒重组抗原PP150的原核表达及在酶联免疫吸附试验检测(ELISA)中的应用.方法 采用基因工程方法组建含有巨细胞病毒PP150蛋白强抗原决定簇基因的重组抗原克隆,进行诱导表达及纯化,在此基础上,以纯化的重组PP150蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化(如抗原的包被,作用时间及底物的选择),确定了判定标准,建立了检测HCMV IgM抗体的间接ELISA方法用此方法检测了266份血清样品,并与DSL公司ELISA试剂盒检测结果相比较.结果 重组表达质粒pMAL-P2-PP150可在E.coliDH5a中有效表达,表达产物经SDS-PAGE电泳后,凝胶成像系统分析显示相对分子质量约为Mr 64000,约占菌体蛋白的10%.Western-blot检测,阳性识别率为80.0%(12/15).用此蛋白包被ELISA板,检测正常孕妇血清,诊断符合率为98.1%,敏感性达88.2%,特异性100%.应用该方法对正常人血清样品检测HCMV-IgM,阳性率为4.1%.结论 该重组蛋白具有良好的抗原性,可望替代HCMV感染检测中的全病毒ELISA试剂盒.
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重组PP150抗原用于胶体金免疫斑点技术检测抗HCMV-IgM
目的: 探索应用重组人巨细胞病毒(HCMV)PP150抗原用于免疫滴金技术检测血清中抗HCMV-IgM的诊断价值. 方法: PCR扩增HCMV pp150抗原决定簇(840～1048aa)编码基因片段,插入原核表探索应用重组人巨细胞病毒(HCMV)PP150抗原用于胶体金免疫斑点技术(CGIDA)检测血清中抗HCMV-IgM的诊断价值. 达载体pMAl-p2,转化宿主菌E.coli,诱导表达及纯化. 重组抗原CGIDA与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对比检测. 结果: 重组抗原CGIDA与ELISA试剂盒比较,符合率达96.0%;CGIDA检测HCMV-IgM的敏感度为74.2%,特异性为100%. 结论: 重组抗原pp150用于 CGIDA对HCMV的早期诊断,具有较好应用价值.
