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稳定转染TNFα及其突变体的骨肉瘤细胞生物学功能的研究
目的 建立转染2种TNFα基因(野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体)的MG63细胞株,研究所转染细胞的TNFα的生物学效应.方法采用逆转录病毒载体,将2种TNFα基因导入人骨肉瘤细胞MG63中,采用流式细胞术、ELISA和生物学活性检测等方法从蛋白表达及其生物学活性2个方面对转染细胞进行检测鉴定.结果野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体分别在MG63细胞中得到有效表达,并具有生物学活性.结论获得2种稳定表达TNFα.的人骨肉瘤细胞株,为进一步研究TNFα的各种生物学行为和探索骨肿瘤的基因治疗奠定基础.
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Caspases在ω-3脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL-60细胞凋亡中的作用
目的探讨ω-3脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL-60细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶(Caspases)之间的关系.方法已证实转染带有脂肪酸受体反应元件的跨膜型TNFα表达载体(pPPRE-tmTNFα)后,HL-60细胞可在ω-3脂肪酸诱导下高效表达跨膜型TNFα.运用MTT比色法、DNA梯形带检测、RT-PCR和免疫印迹技术分析ω-3脂肪酸对转染细胞增殖能力和凋亡的影响,以及细胞Caspase-1、3、8和9基因的表达变化,检测Caspase-8活性以及Caspases特异性抑制剂对肿瘤细胞凋亡效应的拮抗作用.结果HL-60细胞经ω-3脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,可检测到DNA梯形带形成,Caspase-1、3、8和9基因表达增加,Caspase-8活性增高,上述变化在转染细胞中更为显著,Caspases抑制剂可以部分拮抗ω-3脂肪酸联合跨膜型TNFα对HL-60诱导凋亡和抑制增殖的作用.结论ω-3脂肪酸可以联合跨膜型TNFα更有效的诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,而上调Caspases的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用.
