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大鼠胰腺不同发育时期胰岛素分泌相关基因的表达
目的 探讨与胰岛素分泌相关基因在大鼠发育不同阶段的表达趋势.方法 采用高密度寡核苷酸芯片和RT-PCR技术对孕12.5 d(E12.5)、E15.5 d(E15.5)、E18.5 d(E18.5)初生和成年大鼠胰腺进行基因转录水平分析.结果 在大鼠发育不同阶段胰岛素mRNA持续表达;调控胰岛素基因表达的相关转录因子多在E12.5或E15.5开始表达(分别占60%和20%);与胰岛素分泌相关的基因多在胚胎发育中后期开始表达(占66.7%),其中基因Rim1在胰腺发育不同时期呈现差异表达,于初生期达到表达高峰.结论 胚胎发育中后期是胰腺内分泌部发育的关键阶段.
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Munc13-1及RIM1在颞叶癫痫患者及戊四氮大鼠模型中的表达
目的 通过研究神经突触前膜胞内蛋白13-1(mammalian uncoordinated 13-1,Munc13-1)及神经元突触膜胞外分泌调节蛋白1(rab-interacting molecules 1,RIM1)在颞叶癫痫患者皮质和戊四氮点燃癫痫大鼠模型中的表达变化及两者的相关性,初步探讨Munc13-1及RIM1在癫痫发生中的作用及机制.方法 以颞叶癫痫患者病灶切除的皮质为癫痫组(n=18),以脑外伤患者切除的正常皮质为对照组(n=15);取40只SPF级雄性SD大鼠抽签均分成2组,其中一组连续腹腔注射戊四氮(3.5 mg/kg)21 d,出现至少连续3dⅣ级及以上癫痫发作的大鼠为癫痫组(n=15),另一组注射等量生理盐水为对照组(n=20);分别采用免疫组化及免疫荧光技术对Munc13-1进行定位和表达分析,Western blot检测Munc13-1和RIM1的表达变化,免疫共沉淀验证Munc13-1和RIM1的相互作用.结果 ①免疫荧光定位结果显示Munc13-1主要表达于神经元;②免疫组化及Western blot结果显示:在癫痫组中Munc13-1和RIM1的表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.01);③免疫共沉淀示Munc13-1与RIM1之间存在相互作用的关系.结论 Munc13-1及RIM1在癫痫组中的表达均明显升高,且两者间存在相互作用的关系,提示Munc13-1可能通过结合RIM1参与癫痫的发生.
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FBXL20在颞叶癫痫患者及癫痫大鼠模型中的表达变化
目的 通过研究E3泛素连接酶FBXL20及其下游蛋白-神经元突触膜胞外分泌调节蛋白1 (regulating synaptic membrane exocytosis 1,RIM1)在颞叶癫痫患者皮质及匹鲁卡品癫痫大鼠模型皮质、海马组织中的表达变化,探讨FBXL20在癫痫形成中的作用.方法 以颞叶癫痫患者手术切除病灶标本(n=25)为癫痫组,以脑外伤减压手术所切皮质标本(n=10)为对照组.另取40只健康雄性SD大鼠腹腔注射氯化锂(127 mg/kg),20 h后腹腔注射匹鲁卡品(50 mg/kg),每30分钟重复给予1次匹鲁卡品(10 mg/kg),直到大鼠癫痫发作.2周后出现癫痫自发性发作的大鼠纳入癫痫组;2个月后仍未出现癫痫自发性发作的大鼠纳入对照组.采用免疫荧光对FBXL20的表达进行定位;免疫组化检测FBXL20的表达水平;Westem blot检测FBXL20、RIM1的表达水平.结果 免疫荧光检测结果显示FBXL20主要表达于神经元;免疫组化及Western blot检测结果均显示癫痫患者皮质、癫痫大鼠模型皮质与海马中FBXL20表达较对照组明显下降(P＜0.05);同时Western blot检测结果显示RIM1表达较对照组明显升高(P＜0.05).结论 FBXL20在癫痫患者及大鼠模型中的表达水平明显降低,RIM1表达明显升高,提示FBXL20可能通过调控RIM1参与了癫痫的形成.
