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GCRV HZ08文献资料
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草鱼呼肠孤病毒HZ08株外衣壳蛋白VP4的节段克隆表达和免疫学分析
目的 原核表达草鱼呼肠孤病毒(GCRV)HZ08株S6基因特定保守区域编码的外衣壳蛋白VP4并探究其免疫原性,为草鱼出血病(GCHD)防治提供新思路.方法 将VP4基因特定保守区域克隆到原核表达质粒pET-32a(+)中,诱导表达并用镍柱进行纯化,用纯化的目的蛋白免疫SD大鼠获取免疫血清;应用ELISA检测实验组(重组蛋白皮下免疫大鼠)和对照组(PBS免疫大鼠)血清IgG抗体滴度及亚类的水平;应用间接免疫荧光实验(IFA)检测rVP4抗血清对病毒的识别情况.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET32a-VP4重组质粒构建成功;SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中获得高效表达,融合蛋白分子量约为43 kDa,且在37℃、1mmol/L IPTG条件下诱导表达效果优;经亲和层析获得了高纯度蛋白;免疫大鼠6周后血清IgG抗体滴度高达1:819 200,IgG1、IgG2a水平差异无统计学意义(P＞0.05);IFA结果显示抗血清组特异性荧光显著,而对照组未见荧光.结论 GCRV-HZ08 VP4具有良好的免疫原性,可诱导大鼠产生Th1/Th2混合型免疫反应,且rVP4抗血清可识别该病毒,为VP4作为疫苗候选分子提供了依据.
