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大鼠三叉神经节神经元Per1和Per2表达及与nNOS共表达的研究
目的 研究Per1和Per2在大鼠三叉神经节(TG)神经元的表达及与nNOS共表达情况.方法 3月龄SD大鼠分为白天组和黑夜组,各6只,分别12时和24时麻醉、固定,取出三叉神经节,行冰冻切片,应用免疫荧光双染色检测per1、per2和nNOS的表达.结果 TG神经元广泛表达Per1和Per2,Per1在白天组TG神经元显现为强阳性,黑夜组显现为弱阳性,Per2却相反.TG内的Per1阳性神经元中小神经元占74％.Per2阳性神经元中小神经元占74.8％.Per1和Per2与nNOS共表达神经元分别占83.7％和85.9％.结论 研究表明大鼠三叉神经节细胞广泛表达Per1和Per2,nNOS与Per1或Per2在大多数三叉神经节细胞内呈共表达.
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核酶切割per基因所致的缓解吗啡成瘾作用研究
目的探讨per基因与阿片类成瘾的相关性,进而寻找治疗阿片成瘾的基因戒毒疗法.方法设计并合成特异性per锤头状核酶基因和per核酶靶mRNA组分基因,并分别重组入体外转录质粒,而后将经体外转录反应得到per核酶RNA和地高辛标记的per核酶靶mRNA组分.将转录产物混合,在不同条件下进行体外切割反应后,采用地高辛化学发光法检测per核酶的体外切割效率.小鼠脑室注射直接导入脂质体包裹的重组质粒pcDNA 3.1-per RZ DNA,按剂量递增法建立吗啡依赖动物模型,用纳洛酮催瘾,观察戒断反应的变化.结果 per核酶对per核酶靶mRNA组分的体外切割效率达到60% .重组质粒组小鼠的刻板跳跃、"湿狗"样抖动和打洞次数与空质粒组、生理盐水组相比明显减少,但并不抑制小鼠的体重下降.结论 per核酶具有体外定点切割per基因mRNA组分的活性.经小鼠吗啡成瘾模型检测,该重组质粒能成功转染活体小鼠脑细胞并在脑组织内稳定表达per核酶,发挥阻断per基因表达的作用,有效地减轻吗啡成瘾的戒断症状.
