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缓冲液体系文献资料
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细胞凋亡原位检测方法的改进
细胞凋亡不仅在生物体发育过程中与细胞增殖、分化保持动态平衡以维持机体结构和功能的正常,而且细胞凋亡的异常可能是艾滋病、老年性痴呆等神经退变性疾病、缺血性损伤、肿瘤和自身免疫性疾病的重要发病机制.因此,细胞凋亡检测技术可广泛应用于实验研究和临床检验,目前正倍受关注.现将我们在实验研究中使用宝灵曼公司原位细胞死亡检测药盒(POD)的具体做法和一些改进与体会报道如下:1 工作原理本方法是应用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导缺口末端标记法(TdT mediated dUTP nick ending labelling, TUNEL)原位检测凋亡细胞的DNA片段来显示凋亡细胞.细胞凋亡时,核酸内切酶被激活,染色质或DNA被切割,出现单链或双链缺口,产生与DNA断点相同的3'-OH末端,在一定缓冲液体系下脱氧核苷酸末端转移酶将结合有荧光素的核苷酸dUTP,不需要模板标记到缺口3'-OH末端,再用免疫细胞化学方法将结合有HRP的抗荧光素抗体与标记后的DNA断点处荧光素结合,扩大信号,加入HRP显色底物DAB-H2O2后则呈棕色反应沉淀.从而可在光镜下原位观察到凋亡细胞.