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镇肝熄风汤预处理对MCAO大鼠脑组织病理学变化和神经元凋亡的影响
目的:研究镇肝熄风汤对大脑中动脉梗死(MCAO)大鼠脑组织的病理学变化和神经元凋亡的影响.方法:MCAO术前给予高、低剂量镇肝熄风汤(15,30 g·kg-1)灌胃14 d,采用线栓法制备MCAO.术后6h称重法检测脑水肿程度,TTC染色观察脑梗死范围、HE染色观察缺血组织病理形态和海马神经元密度,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)及Western bolt检测凋亡效应蛋白半胱胺酸蛋白酶蛋白(Caspase 3)和聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达情况.结果:与假手术组比较,模型组大鼠出现行为障碍,梗死面积及缺血侧脑组织含水量显著增加,海马CA1区神经元密度明显降低.与模型组比较,镇肝熄风汤高、低剂量均能有效改善大鼠行为学积分,可明显改善MCAO大鼠缺血侧脑组织含水量,减少梗死面积,改善局灶性脑缺血引起的海马CA1区神经元密度降低.镇肝熄风汤预处理后,明显减少MCAO大鼠缺血侧脑组织神经元细胞凋亡率,明显降低缺血侧脑组织活化Caspase-3和PARP蛋白表达量.结论:镇肝熄风汤可能通过影响神经细胞凋亡,发挥保护缺血大鼠脑组织的作用.
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几种抗癌药物诱导胰腺癌细胞凋亡能力的比较
目的:比较抗癌药物诱导胰腺癌细胞凋亡的能力,以期找到一种疗效较好的化疗药物.方法:根据临床常用的高及低剂量,分别将羟基喜树碱、三氧化二砷、紫杉醇、全反式维甲酸、奥曲肽及5-Fu与胰腺腺泡癌细胞SW1990系共同培养6、12、24h,利用光镜及电镜下的形态学方法及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)确定细胞凋亡,并利用AO-EB双重荧光染色法及PI和Annexin-V FITC双重标记下的流式细胞术定量测定细胞凋亡率.结果:上述药物均可诱导SW1990细胞凋亡,凋亡诱导能力由强到弱依次为紫杉醇、5-氟尿嘧啶、羟基喜树碱、三氧化二砷、全反式维甲酸和奥曲肽.各药物的凋亡诱导能力呈剂量和时间的依赖性,其中紫杉醇的作用强且快.结论:紫杉醇可能是一种疗效较好的胰腺癌化疗药物.
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血小板源生长因子和脂多糖对吸烟大鼠小气道平滑肌细胞凋亡的影响
采用免疫组织化学和末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)来观察血小板源生长因子(PDGF)和脂多糖(LPS)对体外培养的吸烟大鼠小气道平滑肌细胞Bcl-2、Bax和凋亡的影响,以探讨其对小气道平滑肌细胞凋亡的调节作用.
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局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑皮质caspase-3,bcl-2的表达
既往大量研究证明, 脑缺血再灌注(ischemia and reperfusion,IR)后神经元死亡有坏死和凋亡两种形式.坏死是不可逆的,而凋亡早期是可逆的,所以神经元凋亡的研究成为热点.神经元凋亡发生发展过程中,caspase家族、bcl-2家族起了重要作用.caspase-3被认为是caspase家族中细胞凋亡关键的效应蛋白酶,它的激活很大程度上依赖细胞色素C从线粒体释放入胞质[1].bcl-2是bcl-2家族中抑制凋亡的代表,与bax或bid促凋亡基因形成异源二聚体,通过调控细胞色素C在线粒体膜的释放调控凋亡[1].本文通过局灶性脑缺血再灌注(focal cerebral ischemia and reperfusion,FCIR)损伤动物模型,观察caspase-3,bcl-2在SD大鼠FCIR损伤后大脑皮质的时相免疫表达,用TUNEL法即寡核苷酸末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记法检测细胞凋亡时相变化,探讨凋亡过程中二者与凋亡的相互关系,为阐明凋亡的机制及IR损伤的防治提供实验依据.
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加巴喷丁对癫痫持续状态大鼠海马区神经元凋亡的影响
目的 研究加巴喷丁(GBP)对癫痫持续状态(SE)大鼠海马区神经元凋亡的影响.方法 SD大鼠48只随机分为对照组、戊四氮致痫组(PTZ组)、GBP组、GBP干预组(干预组),每组12只.戊四氮溶液60 mg·kg-1·d-1腹腔注射诱发SE.干预组致痫后给予GBP 600 mg·kg-1·d-1;GBP组仅给予GBP 600 mg·kg-1·d-1;对照组和PTZ组给予0.9%氯化钠溶液灌胃.采用头皮针状电极单极导联法观察大鼠痫性放电的脑电图.缺口末端标记法(TUNEL)检验凋亡阳性细胞.结果 TUNEL阳性细胞在PTZ组显著高于对照组(P<0.01);GBP组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);干预组表达低于PTZ组(P<0.05).结论 戊四氮致SE大鼠海马CA1和CA3区神经元TUNEL阳性细胞显著增加,GBP能显著减少TUNEL阳性细胞.
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类风湿关节炎患者滑膜组织和外周血CD4+T细胞的凋亡分析
类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis ,RA)是一种累及全身多关节的自身免疫性炎症性疾病,其病理特征之一为炎性滑膜浸润大量CD4+ T细胞,滑膜细胞增生及血管翳形成,其机理仍未阐明.有学者认为RA的发病与细胞凋亡过程异常有关,并有多种细胞参与,包括滑膜细胞、成纤维细胞、淋巴细胞、软骨细胞等[1].本实验应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术,探讨细胞凋亡在RA发病机制中的作用.
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优甲乐对甲状腺功能减退症大鼠心肌损伤中Caspase-3和Bcl-2表达的影响
目的 观察甲状腺功能减退症大鼠心肌损伤时caspase-3和Bcl-2在心肌细胞中的表达,探讨甲减心肌损伤的发生机制以及与甲状腺功能的关系,及给予左甲状腺素钠(优甲乐,L-T4)进行干预治疗后的影响.方法 用丙基硫氧嘧啶(PTU)连续灌胃制作甲状腺功能减退症大鼠模型.分别动态观察对照组、甲减组和干预组大鼠的心肌病理改变及损伤情况,并同时应用免疫组化技术及末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测Caspase-3和Bcl-2在心肌细胞中的表达及心肌细胞凋亡情况.结果 甲减大鼠出现心肌细胞凋亡,并且随着病程进展凋亡逐渐加重,并与甲状腺功能密切相关.优甲乐干预后细胞凋亡明显减少.结论 甲减时心肌损伤与心肌细胞凋亡密切相关,即心肌细胞凋亡可引起甲减心肌损伤,给予优甲乐干预后细胞凋亡减少,心肌损伤减轻.
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脑胶质瘤中细胞凋亡相关蛋白IASPP、p53的表达
我们采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)和免疫组化检测胶质瘤中细胞凋亡、增殖活性及其p53凋亡抑制蛋白(IASPP)、p53的表达,探讨IASPP蛋白在脑胶质瘤发病机制中的作用.
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大肠癌胃泌素、生长抑素表达与细胞增殖和凋亡的关系
我们用免疫组织化学方法和DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)对60例大肠癌手术切除的癌组织标本进行胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67表达状况和细胞凋亡情况的检测.以探讨大肠癌组织GAS、SS的表达与细胞增殖和凋亡状态的关系.
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细胞凋亡原位检测方法的改进
细胞凋亡不仅在生物体发育过程中与细胞增殖、分化保持动态平衡以维持机体结构和功能的正常,而且细胞凋亡的异常可能是艾滋病、老年性痴呆等神经退变性疾病、缺血性损伤、肿瘤和自身免疫性疾病的重要发病机制.因此,细胞凋亡检测技术可广泛应用于实验研究和临床检验,目前正倍受关注.现将我们在实验研究中使用宝灵曼公司原位细胞死亡检测药盒(POD)的具体做法和一些改进与体会报道如下:1 工作原理本方法是应用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导缺口末端标记法(TdT mediated dUTP nick ending labelling, TUNEL)原位检测凋亡细胞的DNA片段来显示凋亡细胞.细胞凋亡时,核酸内切酶被激活,染色质或DNA被切割,出现单链或双链缺口,产生与DNA断点相同的3'-OH末端,在一定缓冲液体系下脱氧核苷酸末端转移酶将结合有荧光素的核苷酸dUTP,不需要模板标记到缺口3'-OH末端,再用免疫细胞化学方法将结合有HRP的抗荧光素抗体与标记后的DNA断点处荧光素结合,扩大信号,加入HRP显色底物DAB-H2O2后则呈棕色反应沉淀.从而可在光镜下原位观察到凋亡细胞.
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脊髓缺血期椎管内注射三磷酸腺苷对再灌注损伤的影响
目的 观察大鼠脊髓缺血期间椎管内给予三磷酸腺苷对脊髓缺血再灌注损伤的作用.方法 Wistar大鼠随机分为三磷酸腺苷组、生理盐水组、空白对照组.建立大鼠缺血再灌注模型,通过神经功能运动行为学和组织学评价大鼠脊髓缺血再灌注损伤程度,一步法缺口末端标记法检测神经元凋亡情况.结果 三磷酸腺苷组大鼠运动行为学和组织学变化明显优于对照组,神经元凋亡数少于对照组.结论 大鼠脊髓缺血期间椎管内给予三磷酸腺苷可以明显减轻脊髓缺血再灌注损伤,改善运动功能,减少脊髓神经元凋亡和坏死.