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内质网应激对快速起搏家兔心房ANP分泌的影响
目的：探讨内质网应激（ endoplasmic reticulum stress，ERS）对快速心房起搏家兔房颤心房ANP分泌的调节作用。方法：建立快速心房起搏家兔在体模型和离体跳动心房灌流模型进行实验，同时记录体表肢体导联心电图；利用透射电镜观察快速起搏2 h后心房肌内质网超微结构变化，Western blot法检测ERS标志蛋白GRP78的表达，利用放射免疫分析法检测血和灌流液中ANP浓度。结果：（1）透射电镜下可见起搏2 h心房肌肌浆网扩张，大量空泡形成，糖原颗粒聚集明显，缝隙连接增宽，肌丝溶解；（2）起搏2 h组心房组织GRP78表达较对照组明显增加；（3）起搏2 h组血中ANP浓度明显高于假手术组；衣霉素对心房搏出量和房内压无显著性变化，但是明显增加离体跳动灌流心房ANP分泌。结论：内质网应激对心房ANP分泌起调节作用，而快速心房起搏引起心肌ERS，进而参与房颤心房ANP分泌增多。
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外源性蛋白质在白垩斑中的分布
本研究联合使用免疫组化和显微放射成像术,确定血液白蛋白和唾液源性的淀粉酶在白垩斑点病损中的分布及其与脱矿的关系.材料和方法临床拔除的牙以盐水清洗处理后,选12颗邻面有明显白垩斑点的牙浸入甲基丙烯酸盐中,通过病损将每个牙分为两半.一半打磨约100 μm后作显微放射照像,另一半作对照.然后以30%磷酸蚀刻15 s,去掉玷污层,再用Tris-HCl缓冲液冲洗,浸入0.4%豆粉液中过夜,封闭非特异附着的抗体.显微照像组置于孵箱,与抗人血白蛋白或人唾液淀粉酶的多克隆抗体一起孵育2 h,然后冲洗、稀释(以1:30比例);显微照像组与对照组都与抗兔IgG的抗体反应,该抗体复合有直径1 μm的聚苯乙烯颗粒,冲洗干燥后电镜观察.结果显微放射成像将聚苯乙烯颗粒聚集标志的区域分为10条灰色带(0%为正常牙釉质,间隔的暗带则作为100%脱矿而无矿化的病损).带轮廓取下置于扫描电镜下,以颗粒聚集为视野中心,参照裂纹残屑等因素局限免疫反应的特殊脱矿度区域.观察表明,白蛋白首先是在10%～20%脱矿区域发现,且很多(即暗带与病损体部之间的区域),在0～10%脱矿区、表层较少但很明显,而在正常釉质区域则极少;淀粉酶的分布也相似,即在10%～20%脱矿区多,但0～10%脱矿区极少,而大于20%脱矿区较多,白蛋白在大于20%脱矿区约4/6区域不明显.讨论本实验免疫反应指出唾液中蛋白质能进入牙釉质白垩斑点病损中,但尚不能说明病损中淀粉酶来源,不能否定病损内生性蛋白质再分布和聚集的可能性;蛋白质在病损中的分布不均一,大程度抗体标志区在10%～20%脱矿区;不同的蛋白质在病损中分布也不相同,白蛋白出现于病损形成早期;用次氯酸去掉病损中蛋白质,暗层变窄,提示蛋白质存在是引起暗层双折射表现的部分原因,白蛋白在暗层和透明层均存在.蛋白质在某些特定区域大量存在可能是由于晶体孔径、晶体粘接性、pH值等因素复杂的相互反应,蛋白质在这些区域的存在可能抑制其再矿化.[杨德琴摘 刘天佳校]
