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HBx蛋白羧基端缺失对肝癌细胞生物学行为的影响
背景与目的:肝癌组织内普遍存在着截短表达的HBx蛋白,这种蛋白可能与肝癌的发生有关,本研究探讨截短表达的HBx蛋白和野生型HBx对人肝癌细胞Huh7生物学行为的影响.方法:脂质体法介导HBx突变体和野生型HBx重组体转染HBV(-)的Huh7细胞.PCR方法扩增Neo基因检测质粒DNA片段插入.通过MTT、平板克隆形成实验、流式细胞仪和裸鼠成瘤实验检测稳定转染细胞的生物学活性.结果:HBx3′-20和HBx3′-40组细胞生长速度较HBx3′-30组明显增快(P＜0.05);HBx3′-20组[(17.34±2.77)%]和HBx3′-40组[(18.36±2.61)%]克隆形成率明显较HBx3′-30组[(7.31±1.44)%]和pcDNA3组[(6.87±2.38)%]高(P＜0.05).细胞周期检测结果显示,对比于野生型HBx组,HBx3′-20组和HBx3′-40组蛋白的表达能加速Huh7细胞由Go/G1期到S期的进程[S期:(36.96±1.82)%vs.(46.20±3.23)%,(53.99±4.02)%,P＜0.05],相反,HBx3′-10和HBx3′-30组则出现G1期阻滞,而HBx组与pcDNA3空载体组间[(38.60±1.15)%]在S期无明显变化.裸鼠成瘤实验显示,HBx3′-40组[(3.19±0.34)cm3]成瘤体积明显大于HBx3′-30组[(1.58±0.27)cm3]、HBx组[(1.75±0.15)cm3]和pcDNA3组[(1.67±0.12)cm3],各组瘤重存在显著性差异(P＜0.01).结论:对比野生型HBx组,HBx3′-20和HBx3′-40对Huh7细胞的生长具有明显促增殖作用,HBx3′-30组显示出抑制作用.HBx通过缺失突变修饰其生物学功能,在原发性肝癌发生、发展过程中起着重要作用.
