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血管内皮生长因子Ⅱ型受体文献资料
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小鼠VEGFR2胞外1-4IgG样结构域的原核表达、纯化及活性鉴定
目的 获得小鼠血管内皮生长因子Ⅱ型受体(mVEGFR2)胞外1-4IgG样结构域融合蛋白并验证其免疫原性及生物活性.方法 利用RT-PCR法从孕龄14d的Balb/c小鼠胚胎组织中扩增mVEGFR2D1-4基因,测序正确后将其克隆至原核表达载体pET-42a,构建重组质粒pET-42a-mVEGFR2D 1-4.将其转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,目的蛋白用Western blotting鉴定后,亲和层析法纯化融合蛋白,ELISA法检测纯化蛋白的抗原活性,并通过体外细胞培养检测该融合蛋白对血管内皮生长因子(VEGF)促人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的阻断作用.结果 测序结果证实成功扩增出目的基因mVEGFR2D1-4;酶切和测序结果证实pET-42a-mVEGFR2D 1-4原核表达载体构建成功；转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白；Western blotting证实纯化的蛋白能与特异性抗体发生反应；ELISA检测显示纯化后的mVEGFR2D1-4融合蛋白具有免疫原性,并且体外细胞培养试验证实其能阻断VEGF对HUVEC的促增殖作用.结论 成功获得mVEGFR2D1-4/GST融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性及生物活性,为进一步研究以VEGFR2为靶点的抗肿瘤主动免疫治疗奠定了基础.
关键词： 血管内皮生长因子Ⅱ型受体 1-4IgG样结构 原核表达 蛋白纯化
