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RNAi下调F10基因表达对KLE细胞凋亡的影响
目的 探讨小分子双链RNA对KLE细胞中F10基因的沉默效应,并确定F10基因沉默对KLE细胞凋亡的影响.方法 采用体外转录法制备针对F10基因的dsRNA;脂质体转染KLE细胞,荧光定量PCR检测dsRNA转染KLE细胞不同时间后细胞中F10基因的表达水平;流式细胞仪检测F10基因沉默后KLE细胞凋亡的改变.结果 体外转录法能制备足够的dsRNA:F10基因表达水平的检测证实转染KLE细胞的dsRNA下调了F10基因表达,20 nmol/L dsRNA转染48 h的效应为显著,基因下调达到83%;20 nmol/L dsRNA转染48 h,KLE细胞凋亡百分率从0.36%增加至8.91%.结论 体外转录制备的针对F10基因的dsRNA能特异有效沉默KLE细胞中的F10基因;F10基因的表达下调可诱导KLE细胞的凋亡.
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F10下调通过细胞色素C促进KLE细胞凋亡
目的 建立F10基因表达稳定下调的KLE细胞系.探讨F10基因沉默对KLE细胞凋亡的影响及机制.方法 将两条合成的寡核苷酸退火后形成的双链DNA连接到逆转录病毒载体pRetroQ上构建表达质粒pRetroQ-i F10,脂质体转染KLE细胞,嘌呤霉素筛选,获得单细胞克隆;荧光定量RT-PCR鉴定阳性克隆.流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量RT-PCR和western blot检测细胞色素c和Bcl-2表达.结果 两个抗性克隆呈现F10 mRNA表达显著下调.F10基因沉默的KLE细胞克隆凋亡率较对照组增加近9倍,细胞色素C mRNA表达上调、胞浆细胞色素c表迭增加,Bel-2 mRNA和蛋白表达下调.结论 成功构建F10基因表达稳定下调的KLE细胞系,F10基因表达下调导致细胞凋亡;细胞色素C的释放可能是F10沉默诱导KLE细胞凋亡的途径之一.
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2-甲氧雌二醇对人子宫内膜癌细胞凋亡作用的实验研究
目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞凋亡作用的影响.方法:将体外培养的人子宫内膜癌细胞株KLE细胞分为实验组和对照组,其中实验组培养液中加入不同浓度的2-ME,对照组不含2-ME.通过流式细胞仪(FCM)观察KLE细胞的凋亡率及凋亡基因p53和Bcl-2在诱导细胞凋亡中的作用.结果:实验组2-ME浓度为5.0μM～20.0μM时,出现细胞凋亡率升高,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05),实验组2-ME浓度达2.0μM以上时p53和Bcl-2阳性表达率与对照组相比明显下降(P＜0.05).结论:2-ME对体外培养的人子宫内膜癌KLE细胞株有促进凋亡作用.
