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鼠疫耶尔森氏菌三色荧光定量PCR检测方法的建立
目的 建立一种三色荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法.方法 根据鼠疫耶尔森氏菌pPCP1质粒上的pk基因、编码F1抗原在pMT1质粒上的caf1基因以及菌体染色体上的3a基因序列,设计特异性的引物和不同荧光标记的Taqman荧光探针,优化反应体系和扩增条件,考察该方法检测的敏感度、特异性、重复性和稳定性,终建立三色荧光定量PCR检测方法.结果 本研究所建立的方法对鼠疫耶尔森氏菌DNA的扩增效率高,低检出限为1×102 copies/ml,特异性高,重复性的变异系数在合理范围内,稳定性好.结论 建立了一种同时检测鼠疫耶尔森氏菌pla、caf1和3a基因的三色荧光定量PCR方法,该方法敏感度和特异性高,能够实现快速检测的目的.
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益生菌在儿童抗生素相关性腹泻中的预防作用研究
目的 观察益生菌在儿童抗生素相关性腹泻中的预防效果.方法 选取2014年1月-2016年6月采用抗生素治疗的下呼吸道感染患儿60例,根据治疗措施分为对照组30例和观察组30例.对照组采用蒙脱石散、补液、维持电解质平衡等常规方法治疗,观察组采用益生菌治疗,采用荧光定量PCR方法检测患儿肠道菌群,并比较两组患者临床疗效及肠道菌群变化情况.结果 观察组患儿治疗后腹泻持续时间为(2.84±0.98)d,对照组为(3.96±1.03)d,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患儿抗生素使用时间为(5.94±1.10)d,对照组为(10.25±2.51)d,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患儿大便次数恢复时间、大便性(改变时间均短于对照组(P值均<0.05);观察组治疗后患儿肠道菌群双歧杆菌、乳杆菌菌群数均高于对照组(P值均<0.05),大肠杆菌菌群数低于对照组(P<0.05).结论 与常规方法治疗相比,下呼吸道感染患儿采用益生菌治疗效果更理想,能稳定肠道菌群,减少婴幼儿腹泻持续时间,值得推广应用.
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实时荧光定量PCR在副溶血性弧菌食物中毒检测中的应用探讨
目的:应用荧光定量PCR方法快速筛检副溶血性弧菌等食物中毒病原菌,以提高检测速度,与GB培养法比较,探讨两法的符合性和应用价值.方法:采用高度特异、敏感的实时荧光PCR作为初筛方法,用GB方法进行细菌分离培养,用ATB对分离到的病原菌进行鉴定.结果:21份食物中毒病人大便标本实时荧光定量PCR检出副溶血性弧菌特异性DNA核酸阳性18份,GB细菌培养检出18株副溶血性弧菌,两法的阳性符合率一致,检出率均为85.71%.结论:能用实时荧光定量PCR检测食物中毒中的病原菌.与GB培养法相比明显缩短检测周期,报告检验结果及时率提高,达到快速、及时的目的,在食物中毒事件中能更及时查明病因,对临床治疗、流行病学调查和食物中毒处置发挥积极作用.
