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光敏剂MPPa介导光动力诱导人乳腺癌细胞MCF-7的内质网应激途径凋亡
目的 探讨光敏剂MPPa(pyropheophorbide-a methyl ester)介导的光动力作用于人乳腺癌细胞MCF-7,诱导内质网应激途径凋亡的机制.方法 给予不同浓度光敏剂MPPa(0、0.5、1、2、4μmol/L),以及不同能量光照(0、0.9、1.8、2.7、3.6 J/cm2)处理MCF-7细胞,用CCK-8法检测细胞活力.确定2 μmol/L MPPa及1.8 J/cm2光能量为实验剂量.激光共聚焦显微镜观察光敏剂MPPa(2 μmol/L)内质网亚细胞器定位.将MCF-7细胞进行完全随机化分组,分为MPPa-PDT组(给予2μmol/L MPPa及1.8 J/cm2光能量)、空白对照组、单纯MPPa组(2μmol/L MPPa)和单纯光照组(1.8 J/cm2光能量).应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞的凋亡率.Flou-3/MA流式细胞仪检测细胞内Ca2+浓度变化.Western blot检测内质网应激标志蛋白BIP和内质网应激途径相关凋亡蛋白caspase-12、CHOP的表达.结果 MPPa介导光动力对MCF-7细胞有显著杀伤作用,抑制其生长,且抑制作用呈明显的剂量效应关系(P＜0.05);MPPa可富集在内质网上;MPPa-PDT组凋亡率显著高于各对照组(P＜0.05);MPPa-PDT组细胞内Ca2荧光强度较对照组增高(P＜0.05);Western blot检测发现BIP、caspase-12、CHOP蛋白在MPPa-PDT组中各时间点表达升高,而在各对照组中表达较低.结论 MPPa介导的光动力可诱导MCF-7细胞发生内质网应激途径凋亡.
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MPPa光动力作用对鼻咽癌细胞生长抑制的初步研究
目的观察MPPa光动力作用对人鼻咽癌细胞生长的抑制作用及可能机制.方法采用倒置显微镜观察和MTT法检测MPPa光动力作用后人鼻咽癌细胞株CNE2细胞生长状况;应用膜联蛋白Annexin V-PI双染结合流式细胞仪分析和细胞核染色观察MPPa光动力作用后人鼻咽癌细胞株CNE2细胞凋亡的发生情况;罗丹明123结合流式细胞仪分析MPPa光动力作用后人鼻咽癌细胞株CNE2细胞线粒体膜电位的变化.结果MPPa光动力作用显著抑制人鼻咽癌细胞株CNE2细胞的生长,在低浓度MPPa和低能量密度光照条件下其抑制作用呈剂量效应关系,倒置显微镜下观察到MP-n光动力作用组癌细胞数量显著减少,细胞脱落、固缩;MPPa光动力作用人鼻咽癌细胞株CNE2细胞发生凋亡和继发性坏死的比率均显著高于单纯光照射组、单纯MPPa光敏剂处理组和假照射组(P＜0.01),而单纯光照组、单纯MPPa光敏剂处理组和假照射组三对照组间无明显差异(P＞0.05),Hoechst33258细胞核荧光染色荧光显微镜下观察到MPPa光动力作用后癌细胞核固缩、碎裂,可见凋亡小体.MPPa光动力作用人鼻咽癌细胞株CNE2细胞线粒体膜电位下降.结论MPPa光动力作用不仅能有效抑制诱导人鼻咽癌细胞株CNE2细胞生长,而且可诱导其发生凋亡,且MPPa光动力作用可能通过线粒体通路诱导鼻咽癌细胞凋亡.
