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纳米板转导HPV18 E7siRNA对宫颈癌细胞增殖的抑制作用
目的 通过纳米板转导HPV18 E7 siRNA进入HPV18 E7宫颈癌转基因鼠皮肤组织,探讨纳米板转导siRNA的效率及转导的siRNA对宫颈癌细胞增殖的抑制作用.方法 纳米板转导FITC标记的寡聚DNA(代替siRNA)进入小鼠皮肤,观察荧光变化,判断DNA是否被转导进入皮肤细胞中；纳米板转导DiI标记脂质体与siRNA复合物进入小鼠皮肤,测定转导前后和残留在皮肤上的荧光强度,计算纳米板转导siRNA进入组织细胞的效率；纳米板转导E7 siRNA和脂质体的复合物于转基因鼠皮肤中后,BrDU免疫组化检测siE7对宫颈癌细胞增殖的抑制作用.结果 纳米板转导寡聚DNA后绿色荧光逐渐分散变多,表明DNA已逐渐进入小鼠皮肤细胞中.纳米板转导DiI标记脂质体与siRNA进入小鼠皮肤后,通过荧光强度计算得出转染率为50.23％.纳米板转导E7 siRNA进入HPV18 E7宫颈癌转基因鼠皮肤后,能有效抑制宫颈癌细胞增殖.结论 纳米板能高效的转导siRNA进入组织细胞,并且转导进入细胞的siE7能有效抑制宫颈癌细胞增殖.
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运用纳米板转导siRNA抑制HPV基因表达的量效学探究
Hela细胞是人宫颈腺癌细胞株,人乳头状瘤病毒(HPV) 18表达阳性.本实验用纳米板转导靶向于HPV18 E7 mRNA的siRNA进入Hela细胞裸鼠皮下移植瘤(宫颈癌动物模型),分析siRNA对HPV基因表达的抑制作用,进而探讨纳米板在动物水平上转导siRNA的优越性及转导的佳作用时间和浓度.合成针对HPV18E7 mRNA的siRNA(简称siE7),细胞实验检测siE7转录后的沉默效果.采用纳米板转导siE7与GenEscortTMⅢ(转染试剂)复合物进入Hela细胞裸鼠皮下移植瘤,逆转录PCR(RT-PCR)、Western blot分别检测作用0、24、48、72h后瘤体组织HPV18 E7 mRNA及蛋白的表达变化,分析纳米板作用的佳时间.不同浓度siE7与GenEscortTMⅢ体外孵育复合物,分别用纳米板及腹腔注射转导进入Hela细胞裸鼠皮下移植瘤,RT-PCR、Western blot分别检测72 h后瘤体组织HPV18 E7 mRNA及蛋白的表达变化,选择纳米板佳作用浓度,对照腹腔注射组分析纳米板转导siRNA在动物水平上的优越性.体外实验结果证明siE7能有效沉默HPV18 E7 mRNA表达并促进Hela细胞凋亡.动物实验结果证明,纳米板转导的siE7能有效沉默HPV18 E7 mRNA,并抑制HPV18 E7蛋白表达,转导siE7的佳作用时间及浓度分别是72 h、2 μmol/L.与腹腔注射组比较,纳米板转导siRNA在动物水平上有明显的优越性.因此,纳米板能有效转导siRNA进入裸鼠皮下移植瘤组织,并且转导进入的siRNA可有效抑制HPV基因表达.
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纳米板转导HPV16E7siRNA对宫颈肿瘤组织增殖和凋亡的影响
目的:探讨经纳米板转导HPV16 E7siRNA对宫颈癌组织增殖和凋亡的影响.方法:建立裸鼠宫颈癌移植瘤模型,纳米板将HPV16 E7siRNA转导入肿瘤组织细胞,转导后2 d用TUNEL法检测实验组和对照组的凋亡情况,免疫组化法检测实验组和对照组Ki-67的表达情况.结果:经纳米板转导HPV16 E7siRNA后实验组细胞凋亡显著增加,Ki-67表达明显降低,与对照组相比凋亡指数、增殖指数差异均具有显著性(P＜0.05).结论:纳米板转导的HPV16 E7siRNA对宫颈癌肿瘤组织增殖具有明显的抑制作用.
