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雌激素β受体对小鼠海马actin聚合调节蛋白表达的影响及其机制
目的 初步探讨雌激素β受体(estrogen receptor beta,ERβ)在小鼠海马不同发育时期的表达以及ERβ活性改变对actin细胞骨架聚合调节蛋白表达的影响及其机制.方法 C57BL/6小鼠按性别和出生后时间[出生后0(P0)、7(P7)、14 (P14)、28(P28)、56 d(P56)]分为10组,用免疫组化和Western blot检测小鼠海马中ERβ的表达变化.另取动情间期成年雌性C57BL/6小鼠用随机数字表法分为5组:对照组和腹腔注射ERβ活性抑制剂PHTPP(100 μg/kg)1、3、5、7d组.再取同种小鼠用随机数字表法分为5组:假手术对照组,卵巢切除(ovariectomy,OVX)组,OVX 1周后再皮下注射ERβ活性激动剂DPN 1.25、2.5、5.0 mg/kg组,均连续注射1周.用免疫组织化学方法检测海马类固醇受体辅助活化因子-1(steroid receptor coactivator-1,SRC-1)的表达,用Western blot检测海马Rictor、磷酸化蛋白激酶B (phospho-protein kinase B,p-Akt)、Profilin-1、磷酸化cofilin(phospho-cofilin ser3,p-cofilin)和SRC-1的蛋白水平表达变化.结果 免疫组化和Western blot检测发现,ERβ在雌、雄小鼠海马P0组表达较高,P7组和P14组表达较PO组降低(P＜0.05),而P28组和P56组ERβ表达较P7组和P14组升高(P＜0.01).用PHTPP抑制ERβ活性导致Rictor、p-Akt、Profilin-1、p-cofilin和SRC-1的表达下降(P＜0.05),而OVX导致上述分子表达下降可被ERβ活性激动剂DPN逆转(P＜0.05).结论 从出生到成年小鼠海马内ERβ的表达呈U型变化.调节ERβ活性可诱导actin细胞骨架聚合调节蛋白及SRC-1的表达发生改变,提示ERβ可能通过SRC-1/Rictor/p-Akt途径对actin细胞骨架聚合状态进行调节并终介导雌激素(estrogens,E2)对学习记忆的调节.
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BDNF表达下调抑制HepG2细胞侵袭的相关分子机制研究
目的:应用特异性siRNA下调HepG2细胞中BDNF表达,观察对细胞凋亡和侵袭的影响并探讨相关分子机制.方法:在人HCC细胞系HepG2中,采用Western blot方法检测BDNF的表达,采用ELISA方法检测培养液上清BDNF的分泌水平.特异性BDNF-siRNA转染细胞,采用FITC-phalloidin染色方法检测actin 细胞骨架的变化,采用Western blot方法检测细胞内RhoA、Rac1、Cdc42的活化情况.同时,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室测定细胞侵袭能力的变化.结果:HepG2细胞培养上清中BDNF含量为88.56±7.45 pg/ml.在HepG2细胞中,特异性BDNF-siRNA显著抑制BDNF的表达,干扰细胞内actin细胞骨架聚合,RhoA或Racl活性受到抑制,同时凋亡细胞数增加、细胞侵袭能力下降.结论:干扰BDNF的表达可以显著抑制细胞侵袭能力,这可能与阻断actin细胞骨架聚合、以及RhoA或Rac1活化相关.BDNF/TrkB信号通路可能作为阻断HCC发展演进的新靶点,有待于进一步深入研究.
关键词： BDNF 肝细胞癌 侵袭 Rho GTPase actin细胞骨架
