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互补DNA克隆文献资料
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人sCR1结合C3b结构域基因的克隆及在大肠杆菌中高效表达
目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因.方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转化BL21菌,用IPTG诱导表达,表达产物通过免疫印迹实验鉴定.结果获得了预期的扩增目的片段,成功构建了pMD-18T重组克隆载体,核苷酸测序结果与GenBank登录的人sCR1-SCR15-18 cDNA序列一致.成功的构建了原核表达载体pET32-sCR1-SCR15-18,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,并在菌体内形成包涵体.免疫印迹实验显示,在分子量约43×103处出现单一条带的阳性结果.结论从单核细胞中克隆出sCR1-SCR15-18片段基因,人sCR1-SCR15-18在大肠杆菌中得到高效表达.
关键词： 可溶性补体Ⅰ型受体 反转录多聚酶链式反应 互补DNA克隆 蛋白质表达
