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体外培养人牙周牙髓相关细胞中釉原蛋白的表达
目的:观察釉原蛋白(amelogenin,Am)基因在体外培养的人牙龈上皮细胞及口腔外胚间充质来源细胞(人牙龈成纤维细胞、人牙周膜成纤维细胞和人牙髓细胞)中的表达.方法:采用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测培养细胞中釉原蛋白mRNA的表达.采用蛋白质免疫印迹技术检测培养细胞中釉原蛋白的表达.结果:培养的人牙周膜成纤维细胞、牙髓细胞、牙龈成纤维细胞和牙龈上皮细胞中均未检测到釉原蛋白及其mRNA的表达.结论:体外培养的人牙周膜成纤维细胞、牙髓细胞、牙龈成纤维细胞和牙龈上皮细胞不表达釉原蛋白基因.
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头颈部丝氨酸蛋白酶抑制剂基因、血管内皮生长因子在口腔疣状癌中的表达及意义
目的研究头颈部丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Headpin)、血管内皮生长因子(VEGF)在口腔疣状癌中的表达及其相关性.方法应用反转录(RT-PCR)方法分别对6例口腔疣状癌和18例口腔鳞癌的癌组织、癌旁组织及相应正常组织标本行Headpin和VEGF mRNA含量测定.结果Headpin mRNA在口腔疣状癌的癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达逐渐增加(P＜0.01),但癌组织与癌旁组织、癌旁组织与正常组织之间差异无显著性(P＞0.05);Headpin mRNA在口腔鳞癌的癌组织、癌旁组织和正常组织三者中表达逐渐增加(P＜0.01),且癌组织与正常组织、癌旁组织与正常组织之间差异有显著性(P＜0.05);疣状癌和鳞癌中Headpin基因表达水平差异无显著性(P＞0.05);疣状癌中Headpin和VEGFmRNA表达呈负相关(P＜0.05).结论Headpin基因在口腔疣状癌的发生发展过程中可能起重要的抑癌作用;Headpin可能通过下调VEGF发挥抑癌作用.
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人sCR1结合C3b结构域基因的克隆及在大肠杆菌中高效表达
目的克隆表达人可溶性补体受体1型(sCR1)结合C3b结构域基因.方法从外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR克隆编码sCR1-SCR15-18的cDNA,连接pMD-18T载体进行DNA序列分析,再亚克隆pET32原核表达载体,构建pET32-sCR1-SCR15-18重组表达载体,转化BL21菌,用IPTG诱导表达,表达产物通过免疫印迹实验鉴定.结果获得了预期的扩增目的片段,成功构建了pMD-18T重组克隆载体,核苷酸测序结果与GenBank登录的人sCR1-SCR15-18 cDNA序列一致.成功的构建了原核表达载体pET32-sCR1-SCR15-18,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,并在菌体内形成包涵体.免疫印迹实验显示,在分子量约43×103处出现单一条带的阳性结果.结论从单核细胞中克隆出sCR1-SCR15-18片段基因,人sCR1-SCR15-18在大肠杆菌中得到高效表达.
关键词： 可溶性补体Ⅰ型受体 反转录多聚酶链式反应 互补DNA克隆 蛋白质表达
