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珠子参皂苷诱导骨髓干细胞分化为肝样细胞的体外实验研究
目的:观察珠子参皂苷对骨髓干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)分化为肝细胞的影响.方法:在无菌条件下快速处死SD大鼠,收集骨髓细胞,快速悬浮于预冷的NH4Cl低渗盐溶液中裂解红细胞,离心去上清,收集沉淀的细胞,D-Hanks充分洗涤后,用含10％的低糖型DMEM培养基进行扩增培养;取生长状态良好的第四代细胞,随机选择空白组、HGF组(20ng/ml)、珠子参皂苷(50、100和200μg/ml)组,分别与第7天和第14天后观察细胞形态、检测细胞合成糖原,摄取LDL及分泌尿素的能力,进行HGF、c-MET、AFP、Albumin、CK18基因表达和AFP、Albumin、CK18蛋白表达分析.结果:珠子参皂苷和HGF可诱导BMSCs分化为肝细胞,促进其合成糖原、摄取LDL及分泌尿素的能力;可显著增加肝细胞特异性HGF、c-MET、AFP、Albumin、CK18基因表达和AFP、Albumin、CK18蛋白表达.结论:珠子参皂苷体外能促进BMSCs分化为肝细胞,本研究为后续体内进行BMSCs移植和珠子参皂苷联用治疗终末期肝病(ESLD)提供了理论基础和实验依据.
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珠子参皂苷对四氯化碳致大鼠肝纤维化的保护作用
目的:观察珠子参皂苷对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化的保护作用及可能机制.方法:腹腔注射2ml/kg 50％CCl4橄榄油溶液制备大鼠肝纤维化模型,首次注射后分别灌胃给予珠子参皂苷(100和200mg/kg)和秋水仙碱(100 mg/kg),正常组和模型组给予等体积的0.5％羧甲基纤维素钠溶液,每天1次,共8周.8周后取血清,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;肝脏经组织匀浆和HE染色后,分析肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量和形态学,计算肝纤维化分级、胶原纤维面积比、网状纤维面积比;实时定量PCR检测肝组织中SOD1、SOD2、SOD3、CAT和GPX1基因表达,Western blot检测细胞质和细胞核中Nrf2蛋白表达.结果:珠子参皂苷100和200mg/kg和秋水仙碱(100 mg/kg)能明显改善肝功能,降低血液中ALT、AST、ALP和MDA水平,增加SOD、GSH-Px、CAT活性和TP、ALB水平和A/G比值,降低肝纤维化分级、胶原纤维面积比、网状纤维面积比和Hyp含量,改善肝脏组织形态学;上调SOD1、SOD2、SOD3、CAT和GPX1基因表达和促进Nrf2核移位,增加肝细胞核内Nrf2的蛋白表达水平,特别是珠子参皂苷200mg/kg剂量组尤其显著.结论:珠子参皂苷对CCl4致大鼠肝纤维化具有较好的保护作用,促进Nrf2核移位和增强内源性抗氧化系统功能可能是其作用机制之一.
