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人类脐静脉内皮细胞文献资料
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miR-15a在脓毒性休克内皮细胞模型中的表达及作用机制
目的 探究miR-15a在脓毒性休克内皮细胞模型中表达的意义及作用机制.方法 运用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测健康对照者(n=25),脓毒症患者(n=34)和脓毒性休克患者(n=26)血浆样本中miR-15a的表达水平.在人类脐静脉内皮细胞株HUVEC中转染miR-15a模拟物和miR-15a抑制物后,LPS刺激4h后,TER (transendothelial electrical resistance)法测定各组HUVEC跨内皮电阻,并计算通透性.构建荧光素酶报告载体pMIR-肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MYLK)的3'UTR,利用荧光素酶活性检测鉴定miR-15a的预测靶基因MYLK.qRT-PCR和Western blot法分别检测MYLK的mRNA和蛋白质的表达水平.结果 miR-15a在脓毒性休克患者血浆中的含量较脓毒症患者显著下降(P＜0.05).转染miR-15a模拟物能够抑制LPS作用HUVEC后细胞通透性的升高,而转染miR-15a抑制剂则能促进LPS作用HUVEC后细胞通透性的升高.转染miR-15a模拟物显著抑制荧光素酶的活性(P＜0.05),并显著下调HUVEC细胞中MYLK的mRNA(P＜0.05)和蛋白质的表达水平;相反地,转染miR-15a抑制物则显著上调了HUVEC细胞中MYLK的mRNA (P＜0.05)和蛋白质的表达水平.结论 miR-15a能够抑制LPS作用HUVEC后细胞通透性的改变,其可能的作用机制是下调了MYLK的表达.
