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流感嗜血杆菌D蛋白黏膜免疫保护效果研究
目的 评估D蛋白(protein D,PD)黏膜免疫对流感嗜血杆菌感染的保护效果,研究其免疫应答机制,为发展新疫苗提供依据.方法 运用分子克隆技术构建PD蛋白表达质粒;用含有或无霍乱毒素(cholera toxin,CT)的PD蛋白黏膜免疫C57BL/6小鼠,ELISA方法检测血清IgG、唾液IgA及脾细胞的细胞因子分泌水平;建立定植和致死性感染模型,观察细菌清除及小鼠生存情况;以裸鼠和μMT小鼠来研究细胞和体液免疫应答在PD免疫保护效果中的作用.结果 单独PD蛋白黏膜免疫野生鼠能诱导高滴度的抗PD IgG和slgA,血清中IgG1、IgG2a和IgG2b亚型水平相当,脾细胞分泌IL-17A增加,小鼠鼻咽部流感嗜血杆菌清除增加,致死性感染生存率为82％;裸鼠和μMT小鼠免疫PD后对流感嗜血杆菌的清除效应和致死性感染保护作用受损,PD抗血清被动免疫μMT小鼠后其抗感染能力恢复;PD+CT组抗体滴度及脾细胞分泌IL-4和IL-17A水平均高于PD组,细菌清除效应与PD组相似,但无致死性感染保护能力.结论 无佐剂PD蛋白黏膜免疫能有效诱导黏膜应答,抵抗流感嗜血杆菌的定植与致死性感染,为黏膜疫苗的发展提供了可能的选择.
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应用噬菌体随机肽库技术筛选SARS-CoV S蛋白模拟表位
目的筛选SARS病毒(Severe acute respiratory syndrome associated coronavirus,SARS-CoV)结构蛋白D(Spike)特异性的模拟表位,为抗SARS疫苗研究提供基础.方法以抗SARS病毒D蛋白的单克隆抗体为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选,随机挑选30个克隆,经噬菌体酶联免疫吸附(ELISA)法和交叉反应实验鉴定阳性克隆,再进行DNA序列分析和竞争抑制结合实验,以确定SARS病毒D蛋白的模拟表位.结果经噬菌体富集后,从随机挑选的30个克隆中得到了29个编码8种12肽的阳性克隆,8条肽与D蛋白的320～350氨基酸序列有较高同源性,确定Y/F、W、E和K氨基酸残基为模拟表位的骨架结构.结论用噬菌体12肽库成功筛选到了SARS病毒D蛋白的模拟表位,为基于D蛋白的肽疫苗研制提供了基础.
