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MUC1 VNTR文献资料
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通过体内传代和流式分选建立稳定转染MUC1 VNTR的B16细胞株
目的 获得具有较好致瘤性、在动物体内保留表达外源基因MUC1 VNT R(mucin 1,variable number tandem repeats)能力的稳定转染细胞株B16-GFP-MUC1,供MUC1靶向药物研究中体内抑瘤实验所用到的肿瘤模型.方法 用脂质体转染的方法和有限稀释法获得单克隆细胞株;将该细胞株进行体内传代后,流式分选GFP阳性细胞群,并对分选后细胞用有限稀释法进行单克隆化.用流式细胞仪和共聚焦荧光显微镜观察各时期细胞克隆的GFP表达情况 .结果 脂质体转染方法得到的在G418压力选择下存在的细胞B16-1,其G FP阳性细胞比率高为80%左右;致瘤性较差,75 d内仅87.5%小鼠出瘤;体外的稳定性观察中,在无抗生素的培养液中观察5周,其阳性率降至20%左右;经过体内接种后仅有10%左右的肿瘤细胞保留了外源基因的表达.而经过体内传代和流式分选后得到的单克隆细胞群B16-39,其GFP阳性细胞比率＞90%;致瘤性为20 d内100%小鼠出瘤;体外培养8周,GFP阳性的细胞比率＞90%; 体内剥离后的肿瘤细胞的GFP阳性细胞比率均＞90%.结论 对于用于体内动物模型的稳定转染细胞,通过体内传代,流式分选并单克隆化,是获得致瘤性好,体内体外较为稳定的稳定转染细胞株的一个可行方案.
