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酵母呈现SARS冠状病毒S蛋白受体结合区及其鉴定
目的获得能在酵母表面正确折叠的SARS病毒S蛋白的受体结合区.方法通过PCR技术从pVAX1/S质粒扩增出编码S蛋白318至520氨基酸残基的cDNA,酶切后克隆到酵母表面呈现载体pYD1,构建pYD1-RBD重组质粒,转化酵母细胞,流式细胞仪检测所呈现的RBD片段.结果通过流式细胞仪检测到酵母细胞表面有RBD片段的表达,并且此表面呈现的RBD片段与针对RBD不同表位的2株单抗均能结合,SARS病毒免疫的小鼠血清抗体也能与该片段结合.结论酵母表面呈现的RBD保持了天然RBD分子的构象,为基于RBD的药物筛选和疫苗设计提供物质基础.
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人衰变加速因子在酵母细胞表面的呈现
目的 为获得能在酵母表面正确折叠的人衰变加速因子。方法 通过PCR技术从DAF- pBluescript M13-(Amp+)质粒扩增出全长的DAF cDNA,酶切后克隆到酵母表面呈现载体pYD1,构建DAF-pYD1重组质粒,转化酵母细胞,流式细胞仪检测所呈现的DAF。结果 通过流式细胞仪检测到酵母细胞表面有DAF分子的表达,并且此表面呈现的DAF与针对DAF不同表位的3株单抗均能结合。结论 酵母表面呈现的DAF保持了天然DAF分子的构象,为进一步构建DAF的突变体库奠定了基础。