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结合酪氨酸蛋白激酶受体EphB2的功能短肽的筛选
目的筛选能结合酪氨酸蛋白激酶受体EphB2的功能短肽.方法PCR扩增EphB2的配体结合区,定向克隆到融合表达质粒载体pRSET A中,阳性克隆经IPTG诱导表达融合蛋白,并利用Ni-NTA金属螯合亲和层析在变性条件下对表达的蛋白进行纯化,以此纯化蛋白为靶,将其包被于ELISA板上,进行3轮亲和筛选.结果电泳分析表明:表达的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,纯化蛋白质的纯度大于95%.从噬菌体随机12肽库中筛选到1 3个噬菌体阳性克隆.结论获得了具有结合EphB2活性的阳性噬菌体克隆且有共同的基序.
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噬菌体展示法筛选抗人 PTA1单克隆抗体结合肽
目的从噬菌体展示文库中筛选能与抗人 PTA1单克隆抗体 (mAbs)特异性结合的短肽。方法采用 protein-A亲和层析法纯化系列抗人 PTA1mAbs，通过流式细胞术检测筛选出能够阻断 PTA1-Fc融合蛋白与其天然配体结合的 mAb，经过三轮亲和筛选，从噬菌体随机 12肽库中筛选可特异性结合 mAb的重组噬菌体阳性克隆，进而对这些克隆的短肽序列进行测定和分析。结果确定了能够阻断 PTA1-Fc融合蛋白与其天然配体结合的 mAb为 LeoA1，得到了 13个具有特异性结合 LeoA1的重组噬菌体阳性克隆，序列测定结果发现，这些可结合 LeoA1的短肽，有较保守而集中的模式序列，即 WPXHHX序列。结论这些具有保守模式序列的短肽，有可能模拟 PTA1分子的功能表位，成为其天然配体拮抗剂的候选肽段。此外， PTA1分子与其配体结合的功能表位的确定，也为今后寻找天然配体和进一步深入研究 PTA1分子的结构和功能提供了实验依据。
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胃癌相关抗原表位模拟短肽的筛选
目的: 筛选能模拟胃癌相关抗原表位的功能短肽.方法: 利用离子交换层析, 对抗胃癌相关抗原单克隆抗体(mAb)进行纯化, 并以此mAb为靶标,将其包被于ELISA板上,以噬菌体随机12肽库对其进行3轮亲和筛选.结果: 从噬菌体随机12肽库中, 筛选到12个噬菌体阳性克隆.结论: 获得了具有模拟胃癌相关抗原表位的阳性噬菌体克隆, 且有共同的基序.
