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a-N-乙酰半乳糖胺酶文献资料
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a-N-乙酰半乳糖胺酶多克隆抗体的制备及特异性鉴定
目的 制备a-N-乙酰半乳糖胺酶(NAGA)的高效价高特异性的兔多克隆抗体.方法 利用pET22b-NAGA/BL21(DE3)工程菌株表达NAGA,经Ni2+ Sepharose 6 FF亲合层析,Phenyl Sepharose 6 FF疏水层析两步纯化,得到纯度＞95％的NAGA作为抗原免疫新西兰白兔,获得NAGA的兔抗血清,并经HiTrap rProtein A柱纯化获得高效价高特异性的抗体；用间接ELISA法检测抗体效价,用Western blotting评价抗体特异性.结果 制备得到的NAGA兔多克隆抗体血清效价为l × 106,经过rProteinA柱纯化后抗体蛋白纯度＞95％,效价为1 ×105；Western blotting显示:该NAGA兔多克隆抗体只与NAGA发生特异性反应.结论 获得了NAGA的高效价高特异性的兔多克隆抗体.
关键词： a-N-乙酰半乳糖胺酶 蛋白纯化 兔多克隆抗体 特异性
