首页 > 文献资料
-
大鼠肾小球足细胞的原代培养与鉴定
目的 建立一种简单适用的原代培养与鉴定大鼠肾小球足细胞的方法.方法 通过差异过筛法收获SD大鼠(体质量60～100 g)肾小球,2 g/LⅣ型胶原酶消化肾小球,组织块种植法将肾小球种植于添加有ITS-X(含转铁蛋白-亚硒酸钠-胰岛素)的K1-3T3培养基,9～10 d后首次传代培养.通过观察细胞形态结合免疫组织化学SP法检测角蛋白、结蛋白和Wilms瘤抑癌因子-1(WT-1)表达以鉴定足细胞.结果 种植肾小球3d后,可见从肾小球内生长出来的细胞逐渐增多,9～10 d后融合成鹅卵石样外观.传代后的细胞变为大而扁平的星形细胞,有明显突起和微绒毛;免疫组织化学法显示结蛋白表达呈阴性、角蛋白和WT-1表达呈阳性,提示所培养的细胞为足细胞.结论 种植胶原酶消化的肾小球是一种简单易行的原代培养大鼠肾小球足细胞方法.WT-1可作为鉴定大鼠肾小球足细胞的合适标记.
关键词： 肾小球 足细胞 原代培养 大鼠 Wilms瘤抑癌因子-1 -
大鼠肾小球足细胞的原代培养及鉴定
目的 建立一种操作相对简单、重复性较好的大鼠肾小球足细胞原代培养及鉴定的方法.方法 取SD乳鼠,无菌取肾,运用低浓度酶消化法、差异过筛法收集肾小球,将获得的肾小球种植于鼠尾胶原包被的25 cm2细胞培养瓶中,置于37℃、5％CO2恒温恒湿培养箱中孵育.通过倒置显微镜和扫描电镜观察足细胞形态,采用免疫组织化学法检测Wilms瘤抑癌因子-1(WT-1)和足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)的表达以鉴定足细胞.结果 种植第4天,可见大部分肾小球已贴壁,第5天见有细胞从贴壁的肾小球中爬出,第9天见约80％的细胞呈铺路石样融合生长.将种植后第9天的细胞消化传代培养,扫描电镜观察可见扁大而平、有树枝状突出的星形细胞.免疫组化结果显示足细胞标志蛋白Nephrin和WT-1表达阳性,表明所培养的细胞为足细胞.结论 本实验成功建立了一种操作简便、重复性较好的大鼠肾小球足细胞的分离、培养和鉴定方法,为进一步研究足细胞相关性肾脏疾病奠定了基础;WT-1和Nephrin可作为足细胞鉴定的标记蛋白.
