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儿童原发性肾病综合征尿足细胞标志蛋白、足细胞裂孔膜蛋白与尿蛋白关系的研究
目的：探索儿童原发性肾病综合征(NS)蛋白尿与足突损伤间的关系。方法选择2013年9月至2014年3月于哈尔滨市儿童医院泌尿内科住院的20例原发性 NS 患儿为研究对象,并纳入肾病组(n=20)。选择同期于该院门诊体检的10例健康儿童为正常对照组(n=10)。研究组患儿均接受肾上腺糖皮质激素治疗。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测肾病组患儿不同观察时刻及正常对照组儿童随机尿足细胞标志蛋白(PCX)、足细胞裂孔膜蛋白(nephrin)水平,采用免疫比浊法及比色法测定患儿尿蛋白及尿肌酐水平,并计算尿蛋白、尿肌酐比值。结果①肾病组患儿尿 PCX、nephrin 水平和尿蛋白、尿肌酐比值均显著高于正常对照组,且差异有统计学意义(t=2.612,2.843,2.972；P <0.01)。②肾病组患儿激素治疗期间尿 PCX、nephrin 水平和尿蛋白/尿肌酐比值总体均呈下降趋势。相邻观察时刻的尿 PCX 与nephrin 水平比较,差异均无统计学意义(P >0.05)。治疗第8天尿 PCX 和 nephrin 水平较治疗前显著下降,且差异有统计学意义(t=1.934,2.093；P <0.05)。治疗第6天尿蛋白、尿肌酐比值较第4天和治疗前显著下降,且差异也有统计学意义(t=2.042,2.120；P <0.05)。③尿 PCX、nephrin 水平分别与尿蛋白、尿肌酐比值呈正相关关系(r=0.91,0.92；P <0.01)。结论尿 PCX、nephrin 水平随 NS 的恢复而逐渐下降,与尿蛋白指标有良好的相关性,对其进行监测可动态观察足细胞变化,对判断肾小球的损伤及恢复情况有一定的临床意义。
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尿nephrin及α1微球蛋白与大鼠子痫前期发病相关性研究
目的:评估检测尿足细胞裂孔膜蛋白(nephrin)及α1微球蛋白水平对子痫前期(PE)早期诊断的临床意义.方法:将30只SPF级SD雌性妊娠大鼠随机分为PE组、生理盐水组、正常妊娠组,每组10只.于妊娠第11天起,PE组通过鼠尾静脉注射血管紧张素Ⅱ-1型受体拮抗剂(AT1-AA)建立PE模型;生理盐水组注射等量生理盐水;正常妊娠组无药物干预,共注射7 d.自妊娠第10天起,用动物无创血压测试仪测量孕鼠尾动脉收缩压;分别于妊娠第12、16、20天收集3组孕鼠尿液,采用速率免疫散射比浊法检测尿α1微球蛋白水平,采用ELISA法检测尿nephrin水平.结果:与妊娠第10天比较,从妊娠第13天开始,PE组血压显著升高,且随妊娠天数增加逐渐升高(P<0.05).在妊娠第12、16、20天,PE组尿α1微球蛋白、nephrin水平均高于生理盐水组和正常妊娠组(P<0.05),生理盐水组和正常妊娠组尿α1微球蛋白、nephrin水平比较差异均无统计学意义(P>0.05).PE组孕鼠尿nephrin水平与鼠尾动脉收缩压呈正相关(r=0.984,P<0.05).结论:通过孕鼠鼠尾静脉注射AT1-AA可成功建立PE模型.尿nephrin可作为早期肾小球损伤的生物标志物,与尿α1微球蛋白共同检测对于诊断及预测PE肾损害具有重要临床意义.
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子痫前期患者尿液中足细胞裂孔膜蛋白和标记蛋白的检测及意义
目的:检测子痫前期患者尿液中足细胞裂孔膜蛋白和足细胞标记蛋白的浓度并探讨其临床意义.方法:本实验以62例妊娠期妇女为研究对象,分为三组,其中正常妊娠期妇女25例为正常对照组,慢性高血压的妊娠期妇女17例为高血压组,子痫前期患者20例为子痫前期组.ELISA检测各组妊娠期妇女的尿液中足细胞裂孔膜蛋白和足细胞标记蛋白的表达;Bradford法检测各组妊娠期妇女的尿蛋白.结果:足细胞裂孔膜蛋白和足细胞标记蛋白在正常对照组尿液中含量极少,在高血压组中分泌增加,而子痫前期组患者中明显升高(P＜0.01),且在子痫前期组尿液中足细胞裂孔膜蛋白和标记蛋白的分泌含量均成正相关(r2=0.79,P＜0.05).子痫前期组患者中足细胞裂孔膜蛋白和足细胞标记蛋白与尿蛋白浓度成正相关(r2=0.58,P＜0.05;r2=0.79,P＜0.05).结论:足细胞蛋白脱落主要发生于子痫前期患者,且足细胞蛋白脱落量与尿蛋白成正相关,能直接反映妊娠期患者的肾损伤程度,可作为预测罹患妊娠期高血压的指标.
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大鼠肾小球足细胞的原代培养及鉴定
目的 建立一种操作相对简单、重复性较好的大鼠肾小球足细胞原代培养及鉴定的方法.方法 取SD乳鼠,无菌取肾,运用低浓度酶消化法、差异过筛法收集肾小球,将获得的肾小球种植于鼠尾胶原包被的25 cm2细胞培养瓶中,置于37℃、5％CO2恒温恒湿培养箱中孵育.通过倒置显微镜和扫描电镜观察足细胞形态,采用免疫组织化学法检测Wilms瘤抑癌因子-1(WT-1)和足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)的表达以鉴定足细胞.结果 种植第4天,可见大部分肾小球已贴壁,第5天见有细胞从贴壁的肾小球中爬出,第9天见约80％的细胞呈铺路石样融合生长.将种植后第9天的细胞消化传代培养,扫描电镜观察可见扁大而平、有树枝状突出的星形细胞.免疫组化结果显示足细胞标志蛋白Nephrin和WT-1表达阳性,表明所培养的细胞为足细胞.结论 本实验成功建立了一种操作简便、重复性较好的大鼠肾小球足细胞的分离、培养和鉴定方法,为进一步研究足细胞相关性肾脏疾病奠定了基础;WT-1和Nephrin可作为足细胞鉴定的标记蛋白.
