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MALAT1抑制Aβ25-35诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖并促进细胞凋亡及其机制
目的 探讨长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)神经细胞的细胞周期、细胞增殖凋亡的影响.方法 利用β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)处理人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y建立AD细胞模型.将AD SH-SY5Y细胞随机分为对照组、pCDH空载体(pCDH-EV)组、MALAT1过表达(pCDH-MALAT1)组、抑制表达空载体(pSICOR-EV)组、抑制MALAT1表达(pSICOR-shMALAT1)组.噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测转染48 h后的细胞周期和细胞凋亡率,Western blot法检测细胞BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3(caspase-3)以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K (p-PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化的mTOR(p-mTOR)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)蛋白水平.结果 成功构建AD细胞模型和过表达及敲低MALAT1的表达载体.敲低MALAT1水平后,显著抑制AD模型细胞的增殖、细胞阻滞于G1期、促进细胞凋亡.同时上调BAX、caspase-3蛋白水平,下调Bcl2、p-PI3K、p-mTOR、p-GSK3β蛋白水平.过表达MALAT1则可逆转以上作用.结论 敲低MALAT1水平可阻断PI3K/mTOR/GSK3β通路抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞增殖,促进细胞凋亡.
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转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)促进缺氧诱导的肾小管间皮细胞转分化
目的 研究长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)参与缺氧诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化(EMT)调控的机制.方法 HK-2肾小管上皮细胞缺氧处理0、12、24、48、72 h,实时定量PCR检测MALAT1 mRNA和miR-100-3p水平.HK-2细胞分别感染特异性lncRNA慢病毒和miRNA慢病毒下调MALAT1和miR-100-3p,采用实时定量PCR检测MALAT1 mRNA和miR-100-3p水平,免疫荧光细胞化学染色检测上皮钙黏素(ECD)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原蛋白α1链(COL4A1)的表达.构建单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,设置单侧输尿管未结扎组(对照组)、结扎7d组(UUO7d组)、结扎3周组(UU03周组)、腺相关病毒(AAV)组.在UUO动物模型中,采用AAV感染下调MALAT1水平后,采用HE和Masson染色检测各组肾组织病变情况,采用免疫组织化学染色检测肾组织ECD和α-SMA的表达.结果 在缺氧诱导的HK-2细胞中,随缺氧刺激时间延长,MALAT1表达逐渐升高,而miR-100-3p表达逐渐减低;缺氧诱导HK-2细胞72 h后,慢病毒感染下调MALAT1水平,miR-100-3p水平升高,同时ECD表达增加、COL4A1和α-SMA表达降低;缺氧诱导HK-2细胞72 h后,转染下调miR-100-3p水平,MALAT1水平无显著变化,miR-100-3p水平降低,ECD表达降低,COL4A1和α-SMA表达增加;体内实验:与对照组相比,UUO动物模型组MALAT1表达显著升高,而miR-100-3p表达明显降低;AAV组与3周组比较,ECD表达显著升高,而α-SMA表达显著降低.结论 MALAT1可通过负向调控miR-100-3p,进而促进COL4A1表达,促进缺氧诱导的HK-2细胞EMT,并且可以促进UUO肾病小鼠肾脏纤维化.
