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lhp基因文献资料
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结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达
目的: 构建结核分枝杆菌(MTB) lhp基因原核表达载体并进行表达.方法: 用PCR扩增MTB lhp基因, 并克隆入pQE30质粒.测序正确后, 再亚克隆入pET32a(+)质粒, 构建pQE30-CFP10和pET32a(+)-CFP10重组体.结果: 以重组体分别转化DH5α和BL21(DE3)菌后, 经IPTG诱导, pQE30-CFP10未表达目的蛋白; 而pET32a(+)-CFP10则表达出Mr为 20 000左右重组蛋白.SDS-PAGE分析显示, IPTG诱导4 h重组蛋白的表达量高.表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞质中, 表达量占全菌蛋白质的38%, 用Western blot证实其具有良好的抗原性.经Ni-NTA柱纯化, 获得纯度为93%的重组蛋白.结论: 成功地构建原核表达载体pET32a(+)-CFP10, 并获得重组CFP10蛋白, 为MTB重组抗原的应用奠定了基础.
