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建系效率文献资料
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Knockout血清替代品可提高C57BL/6J小鼠胚胎干细胞建系效率
目的:在培养液中添加knockout血清替代品(knockout serum replacement, KSR)代替胎牛血清(FBS)用于建立C57BL/6J小鼠胚胎干细胞(ESC)细胞系, 以便消除血清中的不确定因子对ESC增殖的影响.方法:以C57BL/6J小鼠3.5 d的囊胚为材料分离ESC, 比较KSR和FBS用于建立小鼠ESC细胞系的效率, 并通过体内、外分化验证所分离获得的小鼠ESC 的发育潜能.结果:培养液中添加KSR, 成功从13个小鼠囊胚中分离获得一个ESC细胞系(MES-1), 体外培养传代超过20代仍保持未分化状态, 核型为正常XX型,碱性磷酸酶及oct-4基因高表达, 悬浮培养可以生成拟胚体, 接种到裸鼠皮下可形成畸胎瘤, 注射到ICR小鼠3.5 d囊胚中, ESC可以参与胚胎发育并产生嵌合体小鼠.而培养液中添加FBS的对照组未能获得超过3代的ESC细胞系.结论:在培养液中添加KSR代替FBS适合于C57BL/6J小鼠ESC的分离与培养, 从而可避免实验前对所用血清的筛选.
关键词： knockout血清替代品 C57BL/6J小鼠 胚胎干细胞 建系效率
