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MMP-9-1562位点T等位基因与儿童EV71重症脑炎易感性关系的研究
目的:研究基因MMP-9-1562位点基因多态性与肠道病毒71型(EV71)脑炎的关系,探讨不同基因型对EV71脑炎患病风险及病情程度的影响.方法:运用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测EV71感染阳性病毒性脑炎患儿及正常对照组儿童基因组MMP-9-1562位点碱基变异情况.结果:EV71脑炎重症组MMP-9-1562位点T等位基因频率分布明显高于EV71脑炎轻症组(16％VS7.5％,OR 2.362,95％CI 1.170-4.768,P＜0.05).MMP-9-1562位点T等位基因携带者感染EV71后可明显增加神经系统并发症的发生率.EV71脑炎患儿MMP-9-1562位点T等位基因频率分布与正常对照儿童比较无明显差异.结论:MMP-9-1562位点T等位基因携带者在感染EV71后易发展为重症中枢神经系统感染；MMP-9-1562位点T等位基因可增加EV71感染后神经系统并发症的发生率；MMP-9-1562位点单核苷酸多态性与EV71脑炎的发病率无关.
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肠道病毒71型体外感染树鼩肾细胞特性观察
目的 探讨肠道病毒71型(EV71)对树鼩肾细胞的感染特性.方法 通过组织块贴壁法分离培养树鼩原代肾细胞,观察细胞形态并进行传代培养,利用细胞角蛋白18对树鼩肾细胞进行间接免疫荧光鉴定.用EV71感染树鼩肾细胞,通过倒置显微镜观察细胞病变情况,结合间接免疫荧光实验观察细胞中病毒蛋白的表达情况,采用实时荧光定量PCR技术检测病毒载量,以Vero细胞为对照,研究EV71对树鼩肾细胞的感染情况.结果 通过组织块贴壁法可以快速获得树鼩原代肾细胞,并可进行多次传代培养,细胞为梭形,贴壁呈铺路石状,免疫荧光鉴定为肾上皮细胞.EV71可以感染树鼩肾细胞,使之出现明显的细胞变圆、脱落或解体等病变,免疫荧光实验可以观察到病毒蛋白的分布,实时荧光定量PCR检测病毒载量高可达105拷贝/mL,病变情况和增殖趋势与Vero细胞相似.结论 EV71可以体外感染树鼩肾细胞,该细胞模型可为EV71药物筛选和感染机制研究提供平台.
关键词： 树鼩 肾细胞 肠道病毒71型(EV71) -
2012-2014年太仓市手足口病流行病学和病原学特征
目的 了解太仓市手足口病流行病学和病原学特征,为制定手足口防控策略提供依据.方法 利用国家疾病监测信息管理系统手足口病信息,对太仓市2012-2014年手足口病监测资料进行分析,并采用荧光定量RT-PCR方法,对部分手足口病例进行肠道病毒核酸检测.结果 2012-2014年手足口病发病率为197.3/10万,发病高峰集中在4-7月,城区的发病率高于农村,以＜5岁的散居儿童或幼托儿童为主,男性发病率高于女性;普通病例以其他肠道病毒为主(占44.0％),重症病例以EV71为流行优势株(占80.0％).结论 太仓市手足口病流行具有明显的季节性、人群性以及地区性,引起手足口病病例的病原体主要为CoxA16和其他肠道病毒,且不同年份间流行优势株有所差别,重症病例的流行优势毒株为EV71.
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急性弛缓性麻痹病例中 EV71感染情况及病毒特征分析
目的：分析近10年来福建省急性弛缓性麻痹（AFP）病例中EV71感染情况及病毒变异特征。方法应用描述流行病学分析AFP病例中EV71感染病例流行病学特征及临床表现特点，分析EV71病毒VP1区核苷酸与氨基酸同源性阐析病毒变异特征与趋势。结果根据EV71分离阳性数及 AFP病例报告率推算，2003-2012年6月福建省15岁以下儿童EV71相关AFP病例平均发病率为2．24/1000万，2008年以来呈上升趋势。AFP病例或其健康接触者分离的EV71病毒散在分布于9个设区市，以5-6月份多发，76．0％（19/25）为3岁以下儿童，男童为女童1．5倍。90．91％（20/22）的病例在麻痹前有发热，以单侧肢体麻痹（63．6％，14/22）为主，5例麻痹前有典型的手足口病表现，发病60d随访时2例仍残留麻痹。25例病毒株均属于C4基因型，除2003年分离毒株为C4b亚型外，其余均属于C4a亚型，2009-2011年病毒株间同源性高，与2008年安徽阜阳的代表株间同源性也较高，可能具有同一来源，并呈流行态势。结论利用完善的 A FP监测系统，分析EV71相关AFP病例发病情况及分离株病毒的特征可以从另一侧面反映EV71流行强度及趋势。
关键词： 急性弛缓性麻痹(AFP) 肠道病毒71型(EV71) 流行 监测 -
2009年镇江市肠道病毒71型的分子流行病学研究
目的:扩增2009年镇江市肠道病毒71型(EV71)vp1基因的核苷酸序列,同相关毒株序列进行同源性比对和进化分析,以了解2009年镇江市肠道病毒71型的基因组序列特征及可能的传播来源.方法:采集临床手足口病(HFMD)患者咽拭子标本,抽提病毒RNA,通过巢式PCR扩增肠道病毒71型Vp1基因的核苷酸序列.利用Clustal X和MEGA5.0分析软件,进行同源性分析和构建系统发生树.结果:序列进化分析表明,测序获得的11株病毒基因与C基因型代表株比较接近,尤其与C4基因亚型为相近,并且可进一步划分为C4a进化枝.说明本文的11株病毒皆属于EV71病毒C基因型、C4a亚型.结论:2009年镇江市的EV71病毒株可能与阜阳分离的EV71病毒有相同的起源,均属于C4a亚型,并且C4a亚型的EV71病毒在中国大陆有较广泛的分布和传播.
关键词： 肠道病毒71型(EV71) VP1 分子流行病学 -
2010年深圳市手足口病的病原学检测分析
目的:了解深圳市2010年手足口病的病原学情况,为手足口病的控制和治疗提供实验室依据.方法:采集手足口病病例粪便标本,提取标本中的病毒核酸,采用RT-PCR方法,检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)的核酸.结果:2010年共检测1238例手足口病例,其中重症病例122例.所有病例中,EV71阳性率为43.29％,CA16阳性率为11.14％；重症病例中,EV71阳性率75.4％,CA16阳性率仅1.63％；死亡病例均为EV71阳性.5月份病例数多；城乡结合部为重症病例高发区.3岁以下儿童为手足口病重症高发年龄段.结论:EV71和CA16是引起深圳市手足口病的主要病原体,其中EV71是引起重症病例的主要原因,必须加强对EV71引起的手足口病病例的监测和治疗.
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温州地区引起重症手足口病EV71的分子流行病学研究
目的:通过对温州地区引起重症手足口病EV71型的分子流行学研究,监测基因的变异,为科学防治手足口病工作提供依据.方法:对生物标本提取病毒RNA,检测阳性标本进行病毒分离得到毒株,对EV71型VP1片段、全基因组进行测序和分析.结果:临床诊断重症病例核酸检测阳性中,EV71阳性占所有手足口病阳性的比例为81.10％.从中分离到毒株,证实均为EV71C4亚型.结论:温州全市手足口病疫情的防控形势非常严峻,主要以2周～3周岁儿童为主,5月-7月高发.温州的重症手足口病主要由EV71导致,为C4亚型.重症和死亡病例,可能与EV71病毒5'UTR的空间结构变异有一定的相关性.
关键词： 重症手足口病 肠道病毒71型(EV71) 分子流行病学 序列分析 温州地区 -
中药治疗手足口病64例临床观察
手足口病主要症状表现为手、足、口腔等部位的斑丘疹、疱疹,少数病例可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、循环障碍等,致死原因主要为脑干脑炎及神经源性肺水肿.近年来发病率呈上升趋势,为儿科较常见的传染病.笔者运用中医辨证施治,治疗64例,取得满意疗效,现报道如下.
关键词： 手足口病 甘露消毒丹 清瘟败毒饮 羚角钩藤汤 肠道病毒71型(EV71) -
惠州市儿童手足口病的流行特征及病原学分析
目的 了解惠州市手足口病流行期间(2009-2010年4-10月)的病原学特征及流行病学规律,为科学制定手足口病防控策略提供依据.方法 2009-2010年手足口病流行期间共收集578份疑似手足口病标本,用荧光定量RT-PCR法进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型( EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CoxA 16)定量分型.结果 578例被检测患儿中406例为肠道病毒阳性,阳性率为70.24％; EV71阳性208份,检出率为35.99％; CoxA16阳性145份,检出率为25.09％；手足口病2009年以CoxA 16流行为主,2010年以EV71流行为主.手足口病重症病例EV71阳性率为81.55％.手足口病发病以幼儿为主,主要集中在4岁以下儿童,占83.91％.结论 手足口病在不同时期的肠道病毒感染往往呈现不同的流行特点,年龄小于3岁的EV71阳性手足口病患儿已成为重症病例的危险因子.及时、持续地开展手足口病病原学调查,预测其流行规律,有助于更好的制定其防控措施.
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青海省2009年手足口病疫情监测结果分析
目的 分析2009年青海省手足口病流行病学特征,为手足口病的防控工作提供依据.方法 整理青海省2009年手足口病疫情监测数据资料,采用描述性流行病学方法对手足口病三间分布进行分析.结果 青海省2009年共报告手足口病例2 436例,报告发病率为43.95/10万,全省全年未报告重症以及死亡病例.手足口病病例主要分布在青海省东部地区,一年四季均有发病,6月为发病高峰,以托幼和散居儿童发病较多,发病多的年龄为3岁,男性多于女性.病原学监测结果肠道病毒71型阳性率57.73％,柯萨奇病毒A组16型阳性率为42.27％.结论 青海省手足口病的发生具有明显的地区、季节、年龄、性别差异,2009年引起儿童手足口病的病原体为肠道病毒71型与柯萨奇病毒A组16型,肠道病毒71型略占优势.
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1966-2011年全球肠道病毒71型部分分离株的基因特征及流行病学分析
目的 分析人类肠道病毒71型(EV71)基因特征及流行病学信息.方法 用生物信息学软件对来自13个国家、中国的17省、直辖市不同时间内分离的270株EV71病毒VP1区基因序列进行分析,计算不同毒株的核苷酸差异率以及基因型/亚型内部、之间的同源性,构建系统发生树,分析流行病学信息.结果 270株病毒可分为3个基因型(A、B、C型),B型和C型又各可分为5个亚型;其中A型只有3株,B型和C型占了98.9％.不同毒株的核苷酸差异率为7.1％～25.9％,不同基因型之间的核苷酸差异率为23.0％～ 25.9％.同时从发生树中发现一些区别于B型和C型的“孤儿株”.结论 同一地区可以出现某种基因型/亚型流行很长时间,同一时间内可以出现不同的基因型/亚型在某地区流行,具有明显的时间和地域流行特点.“孤儿株”的发现为EV71的不断进化以及具有基因多态性提供了证据.
关键词： 肠道病毒71型(EV71) VP1 基因特征 流行病学分析 -
北京市2010年手足口病流行情况分析
目的 通过对2010年北京市手足口病流行病学和病原学特征的分析,为手足口病的防控工作提供依据.方法对北京市2010年手足口病疫情监测数据进行流行病学分析.结果 北京市2010年共报告手足口病例45 409例,发病率为258.74/10万,死亡18例,病死率0.04％.手足口病发病地区分布广泛,四季均可发病,以春夏季多见,4～7月为发病高峰季节,以托幼机构和散居儿童发病较多,发病率高年龄段为0～5岁,占92.35％,男性多于女性.病原学监测结果肠道病毒71型阳性率48.19％,柯萨奇病毒A组16型阳性率为30.42％.结论 北京市手足口病的发生有明显年龄、性别、季节差异,发病人群以散居儿童和托幼儿童为主,EV71是近年来引起儿童手足口病的主要病原体,且2010年EV71的比例有所上升,Cox A16的比例有所下降.
关键词： 北京 手足口病 流行病学 肠道病毒71型(EV71) 柯萨奇病毒A组16型 -
肠道病毒71型(EV71)通过网格蛋白介导的内吞途径入侵人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞
目的 研究肠道病毒71型(EV71)入侵人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的内吞机制.方法 利用氯丙嗪(CPZ)、制霉菌素(NT)分别预处理SK-N-SH细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)检测靶细胞中EV71 mRNA水平,免疫荧光细胞化学染色检测靶细胞病毒蛋白1 (VP1)蛋白表达水平;EV71感染SK-N-SH细胞后,激光共聚焦显微镜检测EV71与入侵途径标志分子网格蛋白的共定位.结果 CPZ能抑制靶细胞内EV71 mRNA和VP1蛋白的表达,而NT对其无影响;激光共聚焦显微镜发现EV71与网格蛋白共定位.结论 EV71是通过网格蛋白介导的内吞途径入侵人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞.
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小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备
目的 制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性.方法 合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒pET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选可分泌抗VP1的mAb的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化mAb,并采用SDS-PAGE和Western blot法检测mAb的纯度和特异性;EV71感染Vero细胞,采用间接免疫荧光细胞化学染色和Western blot法评估所制备mAb识别EV71的能力.结果 成功表达了EV71-VP1,制备出了4株杂交瘤细胞(6E、8D、9F和10C),杂交瘤细胞所分泌的小鼠mAb均可识别EV71.结论 成功制备了小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1的mAb.
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西安地区2011年儿童手足口病病原学分析
目的 对西安地区2011年手足口病病原学进行分析,为手足口病的临床诊断、治疗及防治提供科学依据.方法 采集2011年1月～6月555例(其中男性347例,女性208例,年龄范围8个月～6岁,平均年龄2.6岁)西安市儿童医院临床诊断为手足口病患儿咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16).结果 56例重症患者其中45例由肠道病毒71型(EV71)引起,占重症病例的80.4％(45/56),4例由柯萨奇病毒A组16型(CA16)引起,占重症病例的7.1％(4/56).肠道病毒71型(EV71)阳性率与柯萨奇病毒A组16型(CA16)阳性率差异有统计学显著性意义(x2=273.4,P＜0.0001).结论 西安地区2011年手足口病病原学以肠道病毒71型(EV71)为主,与2010年相比肠道病毒71型(EV71)感染有上升趋势,且高发于3岁以下儿童组,重症患者与2010年相同,主要由肠道病毒71型(EV71)引起.
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西安地区36例危重型手足口病患者临床特征分析
目的 了解近年来危重型手足口病(HFMD)患儿临床特征及变化,为临床诊断与治疗提供依据.方法 收集36例危重型HFMD患儿临床资料,包括年龄、性别、症状、体征、实验室检查及临床转归情况.结果 36例患儿中男22例,女14例,男女比例1.57∶1,3岁以内患儿33例(91.67％),5～7月份发病23例(63.89％),城乡比例为1∶8.表现为皮疹36例(100％)、发热35例(97.22％)、肺部啰音30例(83.33％)、呕吐27例(75.00％)、肢体抖动17例(47.22％)、Babinski征阳性17例(47.22％)、休克13例(36.11％).34例(94.44％)为肠道病毒71型(EV71)感染,18例合并流感病毒感染,23例血白细胞升高,24例出现高血糖,15例合并腺病毒感染.19例死亡病例中13例出现高血糖,13例血白细胞升高.结论 3岁以内婴幼儿为危重型HFMD病高危人群,5～7月为高峰季节.EV71感染是危重型手足口病的主要病原；外周血白细胞升高、高血糖是预测病情进展及预后的主要危险因素,应引起高度重视.EV71合并流感病毒感染、腺病毒感染可能是导致手足口病病情加重的危险因素.
关键词： 危重型手足口病 肠道病毒71型(EV71) 临床特点 -
怀化市2008-2015年手足口病流行病学特征分析
目的：分析怀化市2008—2015年手足口病的流行病学特征,为制定本地区手足口病的防控措施提供科学依据。方法采用描述性流行病学方法,对怀化市2008—2015年报告的手足口病病例进行流行病学特征及病原学检测分析。结果怀化市2008—2015年共报告手足口病病例46333例,每年发病率分别为51.04/10万、33.40/10万、98.85/10万、84.79/10万、181.96/10万、126.44/10万、269.57/10万、125.95/10万。共报告重症病例601例,重症病例发生率占比1.30%,报告死亡病例8例,病死率占比0.02%。在此期间怀化市所有县市区均有病例报告,年均发病率较高的分别是鹤城区252.86/10万、中方县159.48/10万、洪江区152.27/10万、芷江县130.13/10万。每年4—6月和10—12月为发病高峰期；0~3岁儿童是发病重点人群,该年龄段发病数占总报告病例数85.07%；男女性别比1.8∶1。在2880份实验室确诊病例中肠道病毒71型阳性1915例,柯萨奇病毒A16型阳性380例,其他肠道病毒阳性585例,2015年其他肠道病毒阳性占比升至43.43%。结论怀化市手足口病在高发季节应继续采取综合防控措施,控制疫情的流行和暴发。
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EV71与CA16双价灭活疫苗诱导小鼠免疫原性研究
目的 评价EV71和CA16双价灭活疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答.方法 分别应用EV71和CA16双价疫苗、EV71和CA16单价疫苗按单针、两针(0,14 d)的程序免疫小鼠,采用细胞病变法检测血清第1针免疫后21 d时中和抗体效价,应用LUMINEX液相芯片技术检测小鼠脾单个核细胞体外经抗原刺激分泌细胞因子的水平.结果 双价疫苗与EV71单价疫苗单针、两针免疫相比,EV71中和抗体几何平均值相近(118.8∶84.0;159.5∶156.8,P＞0.05).双价疫苗与CA16单价疫苗单针免疫诱导的CA16中和抗体均为阴性;两针免疫CA16中和抗体几何平均值一致(30.0∶26.9,P＞0.05).加强免疫7d后,小鼠脾MNC经EV71抗原刺激,双价疫苗较EV71单价疫苗诱导Th2类缅胞因子IL-4、5、6、10和炎症因子TNF-α的分泌水平显著增高(P=0.020,P=0.027,P =0.038,P=0.019,P=0.026);MNC经CA16抗原刺激,双价疫苗与CA16单价疫苗相比诱导细胞因子水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 双价疫苗可诱导与单价疫苗相似的中和抗体应答水平,并可提高Th2类细胞因子应答,研究为EV71和CA16双价灭活疫苗的研发提供了实验依据.
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肠道病毒71型疫苗的中和抗体应答研究
目的:比较我国不同企业研发的肠道病毒71型(EV71)疫苗原液和成品疫苗的小鼠中和抗体应答,为疫苗临床试验提供依据.方法:应用来源于3家疫苗研发企业的EV71疫苗原液(Y1、Y2、Y3),以及相应原液制备的3批成品疫苗(临床申报剂量:M1、M2、M3;相同抗原含量:M1-1、M2-1、M3-1),分别采取2针程序免疫小鼠,检测免疫1针和2针后血清中和抗体效价.结果:分别来自不同生产企业的3个EV71疫苗原液免疫原性相近,免疫剂量均为430 U/0.5 mL/只时,1针后中和抗体阳性率为83.3％ ～90.0％,2针均为100％,中和抗体效价分别为1∶34.9 ～1∶45.9和1∶139.4～1∶285.7;与Al(OH)3吸附后,3批成品疫苗的免疫原性均出现明显增强,162 U/0.5 mL/只的剂量即均可得到与430 U/0.5 mL/只原液相近的抗体阳转率和效价,2针免疫后M3-1抗体效价显著高于M1-1和M2-1(1∶357.3、1∶111.3和1∶97.9,P分别为0.004和0.001).当3批疫苗均采用临床申报剂量免疫时(162,493,506 U/0.5 mL/只),1针免疫后中和抗体阳性率(80％ ～ 100％)和抗体效价(1∶46.8 ～1∶ 115.4)均无显著性差异(P值均＞0.05),2针后中和抗体阳性率均为100％,M3批抗体效价显著高于M1批(1∶958.2、1∶316.8,P值为0.017).结论:3家企业EV71原液的免疫原性接近,成品疫苗2针免疫后均可诱导高效价中和抗体产生,但不同企业的中和抗体升高水平呈现差别,提示临床试验中需重点比较含佐剂疫苗加免后的免疫原性.
关键词： 手足口病(HFMD) 肠道病毒71型(EV71) 中和抗体 免疫原性 疫苗 -
质谱法分析肠道病毒71型疫苗原液的主要蛋白成分
目的 采用质谱法对我国2家进入临床试验肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的主要蛋白成分进行分析和比较,为完善EV71疫苗的质控方法提供实验依据.方法 应用梯度SDS-PAGE法对2家生产自Vero细胞的EV71疫苗原液(A、B原液)进行蛋白电泳分析,蛋白条带经切胶回收、脱色、胰酶酶切后提取蛋白多肽,采用液质联用仪(LC/MS)对回收的各条带蛋白多肽进行二级质谱序列测定.采用酶联免疫法(ELISA)和二喹啉甲酸法(BCA)分别检测浓缩后的疫苗原液中EV71抗原含量和总蛋白含量,计算比活值.结果 将原液浓缩10余倍后经梯度SDS PAGE电泳分析,抗原A为4条带,抗原B为6条带.采用质谱法检测各条带蛋白并搜库分析发现,各条带均含有EV71多聚蛋白;抗原A条带1、3和抗原B的条带1、3、4、5、6含有猴源蛋白.经PSMs(鉴定多肽次数)计算发现EV71蛋白占总蛋白比例分别为96.7％和95.0％,比活值为865.5、291.8 U/μg.结论 质谱法可作为疫苗中蛋白检测的辅助方法,并考虑在多批次检测的基础上提出限量要求,为疫苗质量的一致性提供保障.
关键词： 肠道病毒71型(EV71) 疫苗 蛋白 质谱(MS)
