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低氧环境对黑素瘤细胞增殖及LDH表达的影响
目的 探讨低氧对黑素瘤细胞增殖、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)同工酶亚基(LDH-A、LDH-*/B)蛋白表达及LDH同工酶谱的影响.方法 使用氯化钴(CoCl2)构建黑素瘤A375细胞株低氧模型.用MTT法观察CoCl2诱导低氧下对A375细胞的增殖,探索CoCl2诱导A375细胞增殖的适宜浓度和时间.Western blot技术检测低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)蛋白表达水平以验证低氧模型成功;Western blot技术检测低氧对黑素瘤细胞LDH-A、LDH-B蛋白表达的影响;琼脂糖凝胶电泳技术检测低氧下LDH同工酶谱活性的变化情况.结果 MTT法显示CoCl2诱导的低氧使MM细胞的增殖能力在一定范围内随着CoCl2作用浓度的递增和作用时间的延长而逐渐下降.其中,CoCl2的作用浓度50、100、150、200、250μmol/L时细胞增殖无明显抑制(P＞0.05).CoCl2对A375细胞作用的佳浓度、时间分别是150μmol、48h.Western blot技术结果显示CoCl2可上调A375细胞中HIF-1α、LDH-A蛋白的表达,下调LDH-B蛋白表达(P＜0.05),并呈现出一定的浓度及时间范围依赖性关系;琼脂糖凝胶电泳技术检测结果显示随着低氧浓度的递增,LDH同工酶谱中LDH3、LDH4和LDH5活性逐渐增高,LDH1和LDH2下降(P＜0.05).结论 适量CoCl2可成功诱导A375细胞低氧;低氧具有促肿瘤细胞增殖效应,其可能的机制与HIF-1α、LDH-A过表达,LDH-B表达下调及LDH同工酶谱变化有关.
关键词： 黑素瘤 二氯化钴 乳酸脱氢酶、乳酸脱氢酶同工酶
